细胞表型试验

细胞表型实验前提： 设计实验组和对照组目的：研究肿瘤细胞表型特征或在特定情况下（相关基因或蛋白改变）肿瘤细胞的表型变化。内容： 细胞凋亡、周期、迁移、侵袭、迁移、趋化、增殖、生长等。1. 细胞凋亡?概念：是指细胞在一定的生理或病理条件下，受内在遗传机制的控制自动结束生命的过程。?实验方法：检测试剂盒和细胞流式。?注意点：进行细胞凋亡实验时，要用不含EDTA的胰酶进行消化。磷脂酰丝氨酸（PS）正常位于细胞膜内侧，但在细胞凋亡早期，PS可以从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境。Annexin V 是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，能与 PS高亲和力特异性结合。将Annexin V 进行荧光素FITC 标记可以用流式细胞仪进行检测。胰酶中的EDTA能够螯合钙离子，从而削弱Annexin V结合效率，对凋亡实验造成不可控影响。因此实验时，需要另外购买不含EDTA的胰酶，不能直接使用实验室现有的胰酶。2. 细胞迁移?目的：测定肿瘤细胞的运动特性方法之一。?原理：体外培养单层细胞，人为制造空白区域——“划痕”，细胞逐渐进入空白区使划痕愈合。?实验方法：1） 培养板接种细胞之前先用marker 笔在培养板背面画横线标记（方便定位同一个视野）。2） Day1, 种板，数量以贴壁后铺满板底为宜（也可在划痕前做其它处理如转染、感染）。3） Day2，细胞铺满板底后，用10ul 枪头比着直尺，垂直于孔板制造细胞划痕，尽量保证各个划痕宽度一致。4） 用 PBS冲洗孔板三次，去除划痕产生的细胞碎片，加入有血清/ 无血清培养基。注意点：根据不同细胞系的贴壁情况，选择是否立刻用PBS清洗。例如转染后的huh7 细胞系划痕后易飘起。关于有血清 / 无血清培养基的选择：当划痕实验周期比较短的时候（小于48h），或者不考虑增殖对实验造成的影响，可以用有血清培养基培养。当划痕实验周期比较长的时候，用无血清或者低血清或者用放线菌酮抑制细胞增殖。5） 将培养板放入培养箱培养，每隔8-12 小时（至少一天2 次）取出拍照。例如 RBE细胞隔 6 小时拍照，拍照间隔和拍照时间要根据不同细胞系决定。6） 根据收集的图片，分析实验结果，将实验结果量化。Note ：用 AI 量化结果，建议比较划痕间的距离而非面积。3. 细胞生长和增殖克隆形成?克隆的概念：单个细胞在体外增殖6 代以上（ >1week），其细胞形成的细胞群体。?目的：克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。（贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成...