精品感谢下载载细胞实验的基本操作【细胞培养】一、细胞的复苏：非原代培养的细胞一般冻存于液氮之中，需要培养时要先从液氮中取出使之复苏。细胞复苏的原则——快速融化：必须将冻存在－196 ℃液氮中的细胞快速融化至 37 ℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。具体操作如下：1、实验前准备：1.1、将水浴锅预热至37℃，并将含 10%FBS 的培养液置于其中预热；。1.2、用 75％酒精擦拭紫外线照射30min的超净工作台台面。1.3、在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等等。2、取出冻存管及迅速解冻：2.1、根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的编号。2.2、从液氮罐中取出细胞盒，取出所需的细胞，同时核对管外的编号。2.3、迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻，并要不断的摇动，使管中的液体迅速融化，约1-2min后冻存管内液体完全溶解，取出用酒精棉球擦拭冻存管的外壁，再拿入超净台内。3、平衡离心 将细胞悬液吸到离心管中，1000 ～1500rpm离心 3 分钟；4、制备细胞悬液吸去上清液，加入10 ml 培养液，用吸管轻轻吹打均匀，使细胞悬浮；精品感谢下载载5、细胞计数 细胞浓度以 5×105/ml为宜。6、培养细胞将复合细胞计数要求的细胞悬液吸到培养瓶中，将培养瓶放入37 ℃和 5％CO2 的培养箱内培养（略微拧松培养瓶盖），换液的时间由细胞情况而定。通常，除少数特别注明对DMSO 敏感的细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后， 可直接放入含有 10-15ml （5－10 倍）新鲜培养基的培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可， 如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附的问题。二、细胞的传代：培养的细胞生长至一定密度之后，由于培养液中营养逐渐消耗、代谢物逐步积累（可见到培养液变黄），而且细胞的生长空间也受到限制，就会影响到细胞的继续生存。这时就需要分离出一部分细胞和更新培养液，这一过程就叫做传代。1、贴壁细胞的传代具体操作如下：1.1、传代前准备：1.1.1 、预热培养用液：把装有培养液、PBS 和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。1.1.2 、用 75 ％酒精擦拭双手和经过紫外线照射的超净工作台1.1.3 、正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且可减少污染。1.1.4 、点燃酒精灯：注意火焰不能太小。精品感谢下载载1.1.5 、准备好将要使用的已灭菌的空培养瓶。1.1.6 、取...
