primer premier 为 主 ， primer express 为 辅 （ 针 对 探 针 ）， Oligo 来 验 证 ， BLAST 随 时 检 验 PCR 引物设计原则 PCR引 物 设 计 的 目 的 是 为 了 找 到 一 对 合 适 的 核 苷 酸 片 段 ， 使 其 能 有 效 地 扩 增 模 板DNA序 列
因 此 ， 引物 的 优 劣 直 接 关 系 到 PCR的 特 异 性 与 成 功 与 否
要 设 计 引 物 首 先 要 找 到 DNA序 列 的 保 守 区
同 时 应 预 测 将 要 扩 增 的 片 段 单 链 是 否 形 成 二 级 结 构
如 这 个区 域 单 链 能 形 成 二 级 结 构 ， 就 要 避 开 它
如 这 一 段 不 能 形 成 二 级 结 构 ， 那 就 可 以 在 这 一 区 域 设 计 引 物
现 在 可 以 在 这 一 保 守 区 域 里 设 计 一 对 引 物
一 般 引 物 长 度 为 15～ 30碱 基 ， 扩 增 片 段 长 度 为 100～ 600碱基 对
让 我 们 先 看 看 P1引 物
一 般 引 物 序 列 中 G+C 含 量 一 般 为 40%～ 60%
而 且 四 种 碱 基 的 分 布 最 好 随机
不 要 有 聚 嘌 呤 或 聚 嘧 啶 存 在
否 则 P1引 物 设 计 的 就 不 合 理
应 重 新 寻 找 区 域 设 计 引 物
同 时 引 物 之间也不 能 有 互补性 ， 一 般 一 对 引 物 间不 应 多于4 个 连续碱 基 的 互补
引 物 确定以 后， 可 以 对 引 物 进行必要 的 修饰， 例如 可 以 在 引 物 的 5′端加酶切位点序 列 ；标记生物 素、荧光素、地 高辛等， 这 对 扩 增 的 特 异 性
