引 物 设 计 注 意 事 项 引 物 设 计 在 基 因 的 相 关 研 究 中 极 其 重 要 ， 其 中 自 己 比 较 熟 悉 的 一 点 是 基 于 引 物 设 计 的 全 长cDNA 文 库 的 构 建 。 全 长 cDNA 序 列 的 获 取 是 一 个 十 分 困 难 的 过 程 ， 因 此 这 类 数 据 在 GeneBank 库 中 存 储 较 少 。 在过 去 的 试 验 中 ， 常 见 的 方 法 是 利 用 PCR 对 mRNA 序 列 进 行 多 次 扩 增 ， 尽 可 能 地 获 得 “ 全 长 ”的 cDNA 序 列 ， 但 是 这 样 的 方 法 很 难 得 到 完 整 的 UTR 区 域 。 自 2000 后 ， 发 展 较 迅 猛 的 一 个 方 法 是 日 本 一 个 研 究 所 的 “ Oligo-capping"方 法 。 该 方 法 的过 人 之 处 在 于 ： 为 mRNA 的 设 计 了 两 个 不 同 的 引 物 。 在 3‘ UTR 区 域 ， PolyA 信 号 的 存 在 可 以很 方 便 地 设 计 对 应 的 引 物 ，在 5’ UTR 区 域 ，该 方 法 用 一 段 寡 聚 核 甘 酸 代 替 mRNA 的 帽 子 结 构 ，从 而 很 容 易地 设 计 出对 应 的 引 物 。 从 理论上讲， 这 种试 验 方 法 可 以 得 到 100％的 全 长 cDNA， 但 是 试 验 中 多 种因 素的 制约， 使得该 方 法 得 到 的 cDNA 中 约有50％～80%的 全 长 cDNA。 如果试 验 生物 学家能 够解决这 个 难 题， 那么生物 信 息中 对 基 因 组的 研 究 将会有很 大的 飞跃。 。 。 汗ing， 偶没有做过 相 关 的 试 验 ， 算是 抛砖引 玉了 ， ， 表砸我。 。 基 本 PCR 引 物 设 计 参数 引 物 设 计 的 目的 是 在 两 个 目标间取 得 平衡： 扩 增 特异性和扩 增 效率。 特异性是 指发 生错误引发 的 频率。 特异性不 好或劣等的 引 物 会产生额外无关 和不 想要 的 PCR 扩 增 子 ， 在 EB 染色的琼脂糖凝胶上可 见 到 ；引 物 效率是 指在 每一 PCR 循环中 一 对 引 物 扩 增 的 产物 与理论上成倍增长 量的 接近程 度。 ①引 物 长 度； 特异性一 般通过 引 物 长 度和退火温度控制。 如果PCR 的 退...
