试验一_鸡新城疫血凝HA和血凝抑制HI抗体水平测定法讲解

鸡新城疫血凝（ HA）和血凝抑制（ HI）抗体水平测定法1．本次实验的目的和要求掌握鸡新城疫血凝（HA ）和血凝抑制（HI）抗体水平测定法，以便检查疫苗使用效果和制定合理免疫程序。2．实验内容或原理某些病毒 (如新城疫病毒，禽流感病毒等)能够与动物的红细胞发生凝集，此即为红细胞凝集现象 (HA) 。这种红细胞凝集现象可于病毒悬液中加入特异免疫血清所抑制，即为红细胞凝集抑制试验(HI) 。3．需用的仪器或试剂等动物 健康成鸡 2-5 只，被检鸡15-25 只。器材高压灭菌器、滤纸、试管、试管架、离心机、离心管、三棱针、内径2mm 聚乙烯塑料管 100cm、酒精灯、石蜡、96 孔 V 型微量凝集试验板、0.025mm 微量吸液器、微型振荡器、微量移液器、脱脂棉等。药剂（ 1）浓缩抗原；（2）生理盐水或磷酸缓冲盐水（PBS）；（3）Alsever 细胞保存液；（4）红细胞悬液； （5）待检血清4．实验步骤(1)发现与鉴定病毒：鸡新城疫和禽流感病毒分离后，这些病毒能凝集鸡的红细胞，又能被特异性的已知免疫血清抑制其凝集反应，即可鉴定此病毒。 (2)诊断病毒性疾病：如取同一发病的动物早期和恢复期血清进行红细胞凝集抑制实验，如抗体效价有4 倍以上升高，即有诊断意义。（3）免疫机体抗体效价的测定： 3.鸡新城疫（ ND ）的 HA 和 HI （1）试验准备① 抗原：一般以鸡新城疫Ⅱ系或LaUra 系冻干苗作为已知抗原，进行试验。② 0.7％细胞悬浮液：由鸡翅静脉或心脏采血，放入含有抗凝剂的灭菌试管(按每毫升血加入 3.8％灭菌柠檬酸钠0.2 毫升做抗凝剂 )内，迅速混匀。如当时不用，可直接采血放入红细胞保存液内 (保存液 2 份，血液 1 份)于 4℃冰箱内可保存两周。红细胞悬液的配制：将血液注入离心管中，经3000 转／分钟，离心5-10 分钟，用吸管吸去上清液和红细胞上层的白细胞薄膜，将沉淀的红细胞加稀释液(生理盐水 )洗涤。再用离心机 3000 转／分钟离心5-10 分钟，弃上清，再加稀释液洗涤，如此反复洗涤三次，将最后一次离心后的红细胞泥， 按 0.7％的稀释度加入稀释液(0.7 毫升红细胞泥加99.3 毫升稀释液 )。③ 被检血清：将被检鸡群编号登记，用消毒过的干燥注射器采血，注入洁净干燥试管内(微量法可用孔径2-3 毫米塑料管由翅静脉采血)，在室温中静置或离心，待血清析出后使用。每只鸡应更换一个注射器，严禁交叉使用。④ 稀释液：为灭菌的生理盐水。⑤ 红细胞保存液的配制方法：葡萄糖2.05 克，柠檬酸钠 (...