鸡新城疫血凝(HA)和血凝抑制(HI)抗体水平测定法1.本次实验的目的和要求掌握鸡新城疫血凝(HA)和血凝抑制(HI)抗体水平测定法,以便检查疫苗使用效果和制定合理免疫程序。2.实验内容或原理某些病毒(如新城疫病毒,禽流感病毒等)能够与动物的红细胞发生凝集,此即为红细胞凝集现象(HA)。这种红细胞凝集现象可于病毒悬液中加入特异免疫血清所抑制,即为红细胞凝集抑制试验(HI)。3.需用的仪器或试剂等动物健康成鸡 2-5 只,被检鸡 15—25 只.器材高压灭菌器、滤纸、试管、试管架、离心机、离心管、三棱针、内径 2mm 聚乙烯塑料管100cm、酒精灯、石蜡、96 孔 V 型微量凝集试验板、0。025mm 微量吸液器、微型振荡器、微量移液器、脱脂棉等。药剂(1)浓缩抗原;(2)生理盐水或磷酸缓冲盐水(PBS);(3)Alsever 细胞保存液;(4)红细胞悬液;(5)待检血清4.实验步骤(1)发现与鉴定病毒:鸡新城疫和禽流感病毒分离后,这些病毒能凝集鸡的红细胞,又能被特异性的已知免疫血清抑制其凝集反应,即可鉴定此病毒。(2)诊断病毒性疾病:如取同一发病的动物早期和恢复期血清进行红细胞凝集抑制实验,如抗体效价有 4 倍以上升高,即有诊断意义。(3)免疫机体抗体效价的测定:3。鸡新城疫(ND)的 HA 和 HI(1)试验准备① 抗原:一般以鸡新城疫 II 系或 LaUra 系冻干苗作为已知抗原,进行试验。② 0.7%细胞悬浮液:由鸡翅静脉或心脏采血,放入含有抗凝剂的灭菌试管(按每毫升血加入 3.8%灭菌柠檬酸钠 0.2 毫升做抗凝剂)内,迅速混匀.如当时不用,可直接采血放入红细胞保存液内(保存液 2 份,血液 1 份)于 4°C 冰箱内可保存两周。红细胞悬液的配制:将血液注入离心管中,经 3000 转/分钟,离心 5—10 分钟,用吸管吸去上清液和红细胞上层的白细胞薄膜,将沉淀的红细胞加稀释液(生理盐水)洗涤。再用离心机 3000 转/分钟离心 5-10 分钟,弃上清,再加稀释液洗涤,如此反复洗涤三次,将最后一次离心后的红细胞泥,按 0.7%的稀释度加入稀释液(0。7 毫升红细胞泥加 99.3 毫升稀释液)。③被检血清:将被检鸡群编号登记,用消毒过的干燥注射器采血,注入洁净干燥试管内(微量孔号:滴度:1234567891011121:21:41:81:161:321:641:1281:2561:5171:10241:2048 对255*2:25尹 22法可用孔径 2-3 毫米塑料管由翅静脉采血),在室温中静置或离心,待血清析出后使用.每只鸡应更换一个注射器,严...