黄酮规范标准曲线绘制的试验报告

-/ 黄酮 标准曲线绘制的实验报告1. 总黄酮的测定1.1 实验仪器电子天平 AR2140; 紫外可见分光光度计 UV2754; 型数控超声波清洗器 KQ3200DB; 超级恒温槽 ; Rotavapor R200 旋转蒸发仪 ; FD21C250 冷冻干燥机 2 1.2 试剂及药品芦丁标准品硝酸铝国产分析纯（配成 5 %）亚硝酸钠国产分析纯（配成 10 %）氢氧化钠国产分析纯配成（配成1mol/L ）95%乙醇，无水乙醇国产分析纯（配成60%乙醇 50%乙醇）DPPH· （ 2，2-diphenyl-1-picrylhydrazyl，二苯代苦味肼基自由基）Vc（Ascrobic acid，维生素 C，抗坏血酸）没食子酸对照品：基准纯。大青叶子采摘于海南大学东坡湖畔 1.3 实验步骤： 1.3.1准备工作及波长的确定样品 60℃烘干粉碎机粉碎，过20 目筛，装入试剂瓶中备用。根据查阅文献总黄酮在波长为 510nm处吸收值最大。 1.3.2参照品芦丁标准溶液的制备精密称取 120 ℃干燥至恒重的芦丁标准样品37.5mg 置于 100mL烧杯中 , 用60%乙醇溶解后定容至25mL 容量瓶中 , 摇匀，即可得 1.5mg/mL 的芦丁标准溶液。 1.3.3标准品的测量及绘制标准曲线精密吸取芦丁标准溶液0.0 、1.0 、2.0 、3.0 、4.0 、5.0 、6.0mL , 分别置于10mL 容量瓶中，并定容至刻度线。得到0.0mg/ml 、 0.15mg/ml 、0.3mg/ml 、-/ 0.45mg/ml 、0.6mg/ml 、0.75mg/ml 、0.9mg/ml 的标准品溶液，分别取1ml 到试管中各加 5 %亚硝酸钠溶液 0.3mL 摇匀, 放置 6min , 加 10%硝酸铝溶液 0.3mL 摇匀, 放置 6min , 加 1mol /L 氢氧化钠溶液 4mL ,再用 60%乙醇溶液稀释至刻度 , 放置 15min 后, 分别在 510nm 处测定其吸光度 （Tai,Cai&Dai,2011 ）。（以试剂空白做参比）以吸光度 A 为纵坐标 , 浓度 c 为横坐标 , 绘制标准曲线。用最小二乘法进行线性拟合 , 得 c 与 A 的线性回归方程以及相关系数R2。序号浓度（ ug/ml ）吸光度1 0 0 2 15 0.180 3 30 0.349 4 45 0.546 5 60 0.727 6 75 0.884 7 90 1.063 表 1-1 ：芦丁标准曲线测定数据图 1-2：芦丁标准曲线1.3.5 样品的测试根据查阅文献总黄酮在波长为510nm处吸收值最大。取黄酮提取液，取提液 2ml 至 10ml 的比色管中用 60%的乙醇定容至刻度线则稀释5 倍。取稀释好的溶液 4 份 1ml 置入 10ml 的比色管中，其中一份用60%的乙醇定容，作为参比溶液。其余各份各加5%亚硝酸钠溶液0.3mL 摇匀 ,...