专题 4 DNA 和蛋白质技术课题 2血红蛋白的提取和分离一、凝胶色谱法1．概念：凝胶色谱法也称作，是根据分离蛋白质的有效方法。2．原理：大多数凝胶是由构成的小球体，内部有许多贯穿的通道，当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程，移动速度；而的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在移动，路程，移动速度。二、缓冲溶液1．作用：在一定范围内，缓冲溶液能抵制对溶液的影响，维持 pH 基本不变。生物体内进行的各种生物化学反应都是在进行的，为了能够在下准确模拟生物体内的过程，就必须保持体外溶液的与体内环境中的 pH 基本一致。2．配制：通常由种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的就可以制得在不同 pH 范围内使用的缓冲液。三、电泳1．概念：带电粒子在的作用下发生的过程。2．原理：许多重要的生物大分子，如、等都具有的基团，在一定的 pH 下，这些基团会带或。在电场的作用下，这些带电分子会向着移动。电泳利用了待分离样品中各种分子以及分子本身的、的不同，使带电分子产生不同的，从而实现样品中各种分子的分离。四、实验操作蛋白质的提取和分离一般分为四步：①、②、③和④。1．样品处理血红蛋白由4 条肽链组成，包括两条和两条。每条肽链环绕一个基团。血红蛋白因含有血红素而呈现。样品处理包括、、、等几个步骤。2．透析去除样品中相对分子质量较小的杂质。3．凝胶色谱操作凝胶色谱操作包括凝胶色谱柱的制作、、等。4．SDS 一聚丙烯酰胺凝胶电泳判断的蛋白质是否达到要求，需要进行蛋白质纯度的鉴定。一、1．分配色谱法相对分子质量的大小2．多糖类化合物相对分子质量较小较长较慢相对分子质量较大凝胶外部较短较快二、1．外界的酸和碱 pH一定的 pH 下实验室条件 pH2．1~2使用比例三、1．电场迁移2．多肽核酸可解离正电负电大小形状迁移速度与其所带电荷相反的电极四、①样品处理1．α-肽链分离血红蛋白溶液3．凝胶色谱柱的装填4．纯化透析②粗分离β-肽链带电性质的差异③纯化④纯度鉴定红色红细胞的洗涤血红蛋白的释放亚铁血红素样品的加入和洗脱一、蛋白质的分离原理与方法1．分离原理依据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质、对其他分子的亲和力等，来分离不同种类的蛋白质。2．凝胶色谱法（1）概念：凝胶色谱法也称为分配色谱法，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法，利用具有网状结构的凝胶的...
