为什么利用 RNAi 抑制一个基因的表达较利用反义 RNA 技术更为彻底
答:RNAi 是外源或内源性的双链 RNA 进入细胞后引起与其同源的 mRNA 特异性降解
dsRNA 进入细胞后,在 Dicer 作用下,分解为 21—22bp 的 SiRNA
SiRNA 结合相关酶,形成 RNA 介导的沉默复合物 RISC
RISC 在 ATP 作用下,将双链 SiRNA 变成单链SiRNA,进而成为有活性的 RISC,又称为 slicer
slicer 与靶 mRNA 结合,导致其断裂,进而导致其彻底降解
反义 RNA 是与靶 mRNA 互补的 RNA,它通过与靶 mRNA 特异结合而抑制其翻译表达,反义 RNA 是与靶 mRNA 是随机碰撞并通过碱基互补配对,所以,mRNA 不一定完全被抑制
简述真核基因表达的调控机制
答:(1)DNA 和染色质结构对转录的调控:①DNA 甲基化,②组蛋白对基因表达的抑制,③染色质结构对基因表达的调控作用,④基因重排,⑤染色质的丢失,⑥基因扩增;(2)转录起始调控:① 反式作用因子活性调节,包括表达调节、共价调节,配体调节等蛋白质相互作用调节),②反式作用因子与顺式作用原件结合对转录过程进行调控;(3)转录后调控:①5'端加帽和 3'端多核苷酸化调控,②选择剪接调控,③ mRNA 运输调控,④ mRNA 稳定性调控;(4)翻译起始的调控:① 阻遏蛋白的调控,②对翻译因子的调控,③对 AUG 的调控,④ mRNA5'端非编码区的调控,⑤小分子 RNA;(5)翻译后加工调控:① 新生肽链的水解,②肽链中氨基酸的共价修饰,③信号肽调控
简述 mRNA 加工过程
答:(1)5 端加帽(由加帽酶催化 5 端加入 7-甲苷乌苷酸,形成帽子结构 m7GpppmNP-)
(2)3'端加入 Poly