氨基酸的薄层层析_实验报告

••下载可编辑••生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：第四实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称氨基酸的薄层层析实验日期2015-11-09实验地点第四实验室合作者指导老师评分教师签名批改日期一、实验目的1．掌握薄层层析法的一般原理。2．掌握氨基酸薄层层析法的基本操作技术，包括制板、点样、层析、显色。3.掌握如何根据样品的移动速率（Rf 值）来鉴定被分离的物质（本实验中即氨基酸混合液）。二、实验原理1.薄层层析法：本实验将硅胶作为固相支持物，羧甲基纤维素钠作为黏合剂，两者的混合物作为固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为固定相。当液相展开溶剂在固定相上流动时，由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样、不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同，通过吸附-解吸-再吸附-再解吸的反复进行，混合液中的氨基酸可以彼此分开。2.硅胶吸附薄层层析的特点：层析用硅胶是一种多孔性物质，它的硅氧环交链结构表面上密布极性硅醇基（一 Si—0H）,这种极性的硅醇基能和许多化合物形成氢键而产生吸附。硅胶的吸附能力比氧化铝稍弱，其吸附活性也与含水量呈负性相关，故涂布操作前必须保证平板足够干燥。硅醇基显较弱的酸性，因而，硅胶只能用于中性、或酸性成分的分离，碱性成分不能用它分离，故混合氨基酸样品中的氨基酸组分均为中性或酸性..下载可编辑..••下载可编辑••氨基酸。硅胶的活化温度通常为 1051—1101,不能过高，故活化过程中的烘干温度控制在70°C 左右。3.氨基酸的显色反应：茚三酮水化后生成水化茚三酮，它与氨基酸的羧基反应生成还原茚三酮、氨基醛，与此同时，还原茚三酮又与氨基茚三酮缩合生成紫红色化合物而使氨基酸斑点显色。（氨基酸显色反应的化学方程式参见下图）包帥出姻市溜4.Rf 值鉴定混合氨基酸中含的氨基酸种类：层析中，物质沿溶剂运动方向迁移的距离与溶液前沿的距离之比为 Rf 值。由于物质在一定溶剂中的分配系数是一定的，故移动速率（Rf值）也是恒定的，因此可以根据 Rf 值来鉴定被分离的物质。三、材料与方法1.实验材料1.1 样品：（1）氨基酸标准溶液：0.01mol/L 丙氨酸，0.01mol/L 精氨酸，0.01mol/L 甘氨酸（2）混合氨基酸溶液：以异丙醇作为溶剂将 0.01mol/L 丙氨酸，0.01mol/L 精氨酸,0.01mol/L 甘氨酸按等体积制成混合溶液1.2 试剂：硅胶、0.5%的羧甲基纤维素钠、展层-显色剂（正丁醇、乙酸、水、茚三...