生物化学实验 一、 糖的颜色反应及还原作用 实验一:糖的颜色反应 实验1.1 莫氏实验 一、目的 掌握莫氏(molisch)实验鉴定糖的原理和方法。 二、原理 糖经浓无机酸(浓硫酸、浓盐酸)脱水产生糠醛或糠醛衍生物,后者在浓无机酸作用下,能与α-萘酚生成紫红色缩合物,在糖液和浓硫酸的液面间形成紫环,因此又称“紫环反应”,其反应如下图: 利用这一性质可以鉴定糖。 三、实验器材 1、棉花或滤纸。 2、吸管 1.0ml(*4)、2.0ml(*1)。 3、试管 1.5*15cm(*4)。 四、实验试剂 1、莫氏试剂:称取α-萘酚 5g,溶于 95%乙醇并稀释至 100ml。此试剂需新鲜配置,并贮于棕色试剂瓶中。 2、1%蔗糖溶液:称取蔗糖1g,溶于蒸馏水并定容至 100ml。 3、1%葡萄糖溶液:称取葡萄糖1g,溶于蒸馏水并定容至 100ml. 4、1%淀粉溶液:讲 1g 可溶性淀粉与少量冷蒸馏水混合溶液合成薄浆状物,然后缓缓倾入沸蒸馏水中,边加边搅。最后以沸蒸馏水稀释至100ml。 五、操作 于 4 支试管中,分别加入1ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液和少许纤维素(棉花或滤纸浸在1ml 水中)。然后各加莫氏试剂 2 滴1,摇匀,讲试管倾斜,沿管壁慢慢加入浓硫酸1.5ml(切勿振摇!)硫酸层沉 于试管底 部 与糖溶液分成两 层,观 察 液面交 界 处 有 无紫色环出 现 。 六 、注 意 事 项 1、试管中加入各种 糖后,应做 好 标 记 ,浓硫酸加入的方式 应保 持 一致 。 2、莫氏反应非 常 灵 敏 ,所 用的试剂应洗 净 ,不 可再 样 品 中混入纸屑 等 杂 物。 3、当 糖浓度 过 高 时 ,由 于浓硫酸对 他 的焦 化 作用,将 呈 现 红色及褐 色而 不呈 现 紫色,需稀释后再 做 。 思 考 题 : 1、解 释α-苯 酚反应的原理。 2、用莫氏试验鉴定糖时 需注 意 哪 些 ? 试验1.2 塞 氏试验 一、 目的 掌握塞 氏(Seliwanoff)实验鉴定酮 糖的原理和方法。 二、原理 酮糖在浓酸的作用下,脱水生产5-羟甲基糠醛,后者与间苯二酚作用,呈红色反应,有时亦同时产生棕色沉淀,此沉淀溶于乙醇,呈鲜红色沉淀2,以果糖为例,其反应如下: 三、实验器材 1、吸管 0.5ml(*3)、5.0ml(*1)。 2、试管 1.5cm*15cm(*3)。 3、水浴锅。 四、实验试剂 1、塞氏试剂:溶50mg 间苯二酚于100ml 盐酸中[V(H2O):V(HCl)=2:1], 临用时配制。 2、1%果糖溶液:称取果糖1g,溶于蒸馏水并定容至 ...