第三章分光光度计

第三章分光光度计 分光光度计和光电比色计的工作原理相同，都是利用物质对不同波长的光选择性吸收的现象，对物质进行定量及定性分析的仪器。 第一节 分光光度计的类型 分光光度计也有多种分类方法。按工作波长范围不同来划分，分光光度计分为红外分光光度计、紫外分光光度计和可见（光）光分光光度计三类。其中的紫外分光光度计均兼有可见光分光光度计的功能。 按待分析物质对光的吸收性质不同，可分为分子吸收光分光光度计和原子吸收分光分光光度计两类。上述的红外、紫外和可见分光光度计均属于分子吸收分光光度计。 按待分析物质对光的作用效果来分，可分为发射光谱类分光分光光度计和吸收光谱类分光光度计两大类。在医学上应用的发射光谱类分光光度计主要有荧光(分光)光度计和火焰(分光)光度计两类。分子吸收光分光光度计和原子吸收分光分光光度计都属于吸收类分光光度计。 本节主要介绍基层医院最常用的721 及 722 型两种可见（光）光分光光度计。 第二节 可见分光光度计的原理及结构 一、工作原理 吸收式分光光度计都是根据物质对不同波长的光具有选择性地吸收的特点而进行工作的，它们都以朗伯-比尔定律作为定量依据。 当一束平行的、特定波长的单色光照射到有色溶液后，该有色溶液就会对光产生吸收。溶液的浓度越大，对光的吸收越多。其吸收程度符合朗伯-比尔定律。即 T＝（Ｉt／Ｉ0） 100% Ａ ＝－lgＩt／Ｉ0＝ＫＣＬ 式中：Ｔ 为透射比。 Ｉt为透过光的强度。 Ｉ0入射光的强度。 Ａ 为吸光度。也叫消光度或光密度。 Ｋ为吸收系数。 Ｃ 为溶液的浓度 Ｌ 为溶液的厚度。 朗伯-比尔定律（Ａ ＝ＫＣＬ）说明：当一束光通过有色溶液后，溶液的吸光度A 与溶液的浓度C 及液层厚度L 成正比。吸光度A 与溶液的透射比T 成负对数关系。 比色分析时，溶液的透射比T 很容易测量出来。通过对透射进行负对数计算，可以得到吸光度值。再将吸光度除以相应的系数，便可求出待测溶液的浓度。 二、基本结构 一般的可见分光光度计由光源、单色器、比色皿、光电转换器、前置放大器、对数放大器、显示部件及电源电路组成。如图3 -2 -1 所示。图中的虚线部分也可以没有。 图 3 -2 -1 分光光度计基本结构图 图中各部分的作用如下： 光源灯发出的复合光经单色光器后，变为单色光。此单色光通过比色皿时，被比色皿中盛放的样品液吸收掉一部分，然后照在光电转换（检测）器上。光电转换器将照在它上面的光信号的...