免疫组织化学技术的原理及免疫组织化学技术的原理及方法方法免疫组织化学技术的原理及其方法免疫组织化学技术的原理及其方法一一..基本知识基本知识二二..基本原理基本原理三三..方法方法四四..结果的判断及异常着色原因分析和对策结果的判断及异常着色原因分析和对策一、免疫组化技术的基本知识一、免疫组化技术的基本知识一、免疫组化技术的基本知识一、免疫组化技术的基本知识免疫组化的基本概念免疫组化的基本概念利用抗原利用抗原--抗体特异性结合原理检测抗原或抗体特异性结合原理检测抗原或抗体一般是用抗体检测抗原抗体一般是用抗体检测抗原抗原抗原两个主要属性：免疫原性及特异反应性，蛋两个主要属性：免疫原性及特异反应性，蛋白质具有抗原性白质具有抗原性抗体抗体与抗原能特异性结合—生物学结合是免疫球与抗原能特异性结合—生物学结合是免疫球蛋白蛋白IgIg免疫球蛋白的化学结构及其模式图免疫球蛋白的化学结构及其模式图免疫球蛋白根据重链结构命名免疫球蛋白根据重链结构命名IgG(γ),IgA(α)IgG(γ),IgA(α)，，IgD(δ),IIgD(δ),IgE(ε),IgM(μ)gE(ε),IgM(μ)五种免疫球蛋白只有两种类五种免疫球蛋白只有两种类型的轻连，即：型的轻连，即：Kappa(κ)Kappa(κ)和和Lambda(λ)Lambda(λ)每个抗体分子的轻链必须相每个抗体分子的轻链必须相同；某一单独的抗体分子决不同；某一单独的抗体分子决不可能既有可能既有κκ链又有链又有λλ链。这一点链。这一点在免疫组化的淋巴瘤诊断中十分在免疫组化的淋巴瘤诊断中十分重要。重要。免疫球蛋白的化学结构及其模式图免疫球蛋白的化学结构及其模式图Fc(FragmentcrystalliFc(Fragmentcrystalline)ne)是免疫球蛋白的羧基端，意是免疫球蛋白的羧基端，意为结晶片段，因其纯化时呈结晶为结晶片段，因其纯化时呈结晶状态而名之，该片段与抗原特异状态而名之，该片段与抗原特异性有关性有关Fab(FragmentantigenFab(Fragmentantigenbingding)bingding)该端是抗体与抗原特异性结合该端是抗体与抗原特异性结合的部位，每分子的部位，每分子IgIg能结合能结合22个抗个抗原分子原分子FFccFFababAAgg多克隆抗体与单克隆抗体及其产生多克隆抗体与单克隆抗体及其产生多克隆抗体：多株多克隆抗体：多株BB细细胞针对多个抗原决定簇胞针对多个抗原决定簇产生的抗体产生的抗体单克隆抗体：针对某一单克隆抗体：针对某一抗原决定簇，由单株淋抗原决定簇，由单株淋巴细胞（克隆）所产生巴细胞（克隆）所产生的抗体的抗体多克隆抗体单克隆抗体多克隆抗体与单克隆抗体及其产生多克隆抗体与单克隆抗体及其产生多克隆抗体的产生多克隆抗体的产生以纯化的抗原免疫动物而获得，实际上是针对多个以纯化的抗原免疫动物而获得，实际上是针对多个抗原决定簇的多个抗体组成，检测范围广。在病理抗原决定簇的多个抗体组成，检测范围广。在病理诊断中，有利划归肿瘤的基本类型。诊断中，有利划归肿瘤的基本类型。常用的多克隆抗体一般在兔身上产生，国外产品目常用的多克隆抗体一般在兔身上产生，国外产品目录上常以录上常以RaHRaH（（RabbitagainstHumanRabbitagainstHuman）表之。）表之。多克隆抗体亦可产生于羊、猪、豚、鼠等。弄清一多克隆抗体亦可产生于羊、猪、豚、鼠等。弄清一抗多克隆抗体的动物来源种类，对后继抗体的选用抗多克隆抗体的动物来源种类，对后继抗体的选用至关重要。至关重要。多克隆抗体与单克隆抗体及其产生多克隆抗体与单克隆抗体及其产生单克隆抗体的产生单克隆抗体的产生应用细胞融合的杂交瘤技术应用细胞融合的杂交瘤技术（（HybridizationHybridization），以针对），以针对单一抗原决定簇的小鼠与小鼠单一抗原决定簇的小鼠与小鼠骨髓瘤细胞（肿瘤性骨髓瘤细胞（肿瘤性BB细胞）细胞）融合形成杂交瘤，其特点是既融合形成杂交瘤，其特点是既能产生特异性抗体，又能在体能产生特异性抗体，又能在体外无限地增殖。将瘤细胞在体外无限地增殖。将瘤细胞在体外培养或注入小鼠腹腔内而获外培养或注入小鼠腹腔内而获单克隆抗体，由此产生的小鼠单克隆抗体，由此产生的小鼠抗人（抗原）的抗体常以抗人（抗原）...
