生 物 学 大 实 验 （ 二 ） 实 验 名 称 ： 质 粒 扩 增 、 提 取 和 鉴 定 实 验 实 验 目 的 通 过 对 智 力 扩 增 、 提 取 和 鉴 定 试 验 的 实 验 原 理 介 绍 和 实 际 操 作 ， 加 深 对 分 子 生物 学 基 本 技 术 的 理 解 和 掌 握 。 实 验 仪 器 设 备 ： 电 子 天 平 、 高 压 蒸 汽 灭 菌 锅 、 摇 床 、 离 心 机 、 不 同 型 号 移 液 枪 若 干 支 、磁 力 搅 拌 器 、 恒 温 水 浴 锅 、 电 炉 、 制 冰 机 、 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 仪 、 超 净 工 作 台 等 。 实 验 原 理 ： 质 粒 主 要 存 在 于 细 菌 、 放 线 菌 和 真 菌 细 胞 中 ， 通 过 对 细 菌 、 放 线 菌 和 真 菌 的培 养 来 实 现 对 质 粒 的 扩 增 。经 过 处 理 的 线 状 dna 在 外 界 环 境 恢 复 正 常 的 时 候 不 能够复 性 而质粒 dna 可以复 性， 从而可以实 现 质 粒 dna 和 染色体dna 的 分 离 。 限制 性内切酶能特意地结合于 一端被称 为限制 性酶识别系列的dna 系列之内或其附近的 特异位点上， 并切割dna。 当对提 取 的 质 粒 dna 进行电 泳 时 ， 同 一质 粒 dna 其超 螺旋形式的 泳 动速度要 比开环 和 线 状 分 子 的泳 动速度快。 实 验 步骤： 一 质 粒 扩 增 （ 1） 普通 lb 固体培 养 基 制 备 ： 制 备 lb 培 养 基 ， 倒入灭 菌 瓶中 高 压 灭 菌 ， 待完全冷却后， 保存 备 用。 （ 2） 将大 肠杆菌 接种于 lb 培 养 基 中 ， 37℃振荡培 养 过 夜(200 转/分 ) 二 质 粒 dna 的 提 取 (碱法) 1 将菌 液 倒入1.5ml 的 微量离 心 管中 ， 12000rpm 离 心 一分 30 秒， 弃去上清液 ， 以得到较多的 细 菌 沉淀； 2、 将微量离 心 管开口倒置在 卫生 纸上， 使离 心 管底部的 液 体流尽。 3、 加 入100μl 用冰 预冷的 溶液 i， 剧烈振荡， 将沉淀彻底悬浮， 然后室温 放 置5 分 钟。 4、 加 入200μl 现 配的 溶液ii， 盖紧管口， 轻轻快速颠倒离 心 管（ 不 要 振荡， 以避免dna 断裂）， 使混合物 混匀， 冰 ...
