DPPH和ABTS、PTIO自由基清除实验操作图解李熙灿XicanLiVIP专享

1 DPPH•和ABTS+•自由基清除实验（含PTIO•自由基清除实验)：详细说明与疑难解答 李熙灿（广州中医药大学中药学院, 2019.7） （以下内容系来源于实验经验及三个参考文献[1]Li, X., Comparative Study of 1,1-Diphenyl-2-picryl-hydrazyl Radical (DPPH•) Scavenging Capacity of the Antioxidant Xanthones Family. Chemistryselect, 2018. 3,13081-13086. [2]Li, X.; Ouyang, X.; Cai, R.; Chen, D. 3’,8”-Dimerization Enhances the Antioxidant Capacity of Flavonoids: Evidence from Acacetin and Isoginkgetin. 2019, Molecules. 24, 2039. [3]Li, X.C., 2-Phenyl-4,4,5,5-tetramethylimidazoline-1-oxyl 3-Oxide (PTIO•) Radical Scavenging: A New and Simple Antioxidant Assay In Vitro. J. Agric. Food Chem., 2017. 65,6288-6297 【概述】DPPH•、ABTS+•、PTIO•自由基三者，都是常用的自由基。概述如下表： DPPH•自由基 ABTS+•自由基 PTIO•自由基 结构式 NNO2NO2NNO2 NNOO 简单表达式 DPPH· ABTS·+ PTIO· 分子式与分子量 C18H12N5O6; M.W. 394.3 C18H24N6O6S; M.W. 548.68 C13H17N2O2; M.W. 233.3 带电情况 中性自由基 阳离子自由基 中性自由基 种类 氮自由基 （成单电子在 N 原子上） 氮自由基 （成单电子在 N 原子上） 氧自由基 （成单电子在 O 原子上） 外观 紫黑色粉末 没有纯的 ABTS·+ 紫褐色粉末 溶解性与溶液颜色 溶于有机溶剂（如甲醇、乙醇） 溶液呈紫色，浓度越高，颜色越深 溶于有机溶剂（如甲醇、乙醇）、水以及水性的缓冲液 溶液呈墨绿色，浓度越高，颜色越深 溶于水以及水性的缓冲液 溶液呈蓝紫色，浓度越高，颜色越深 CAS 号 1898-66-4 无 18390-00-6 工作液配制方法 将已购的 DPPH 自由基粉末，溶解即得其工作液 将已购的 ABTS 二铵盐[(NH4)2ABTS]与过二硫酸钾(K2S2O8)黑暗中反应 12 小时后，再稀释得其工作液。 将已购的 PTIO 自由基粉末，溶解即得其工作液 2 工作液外观 紫色 墨绿色 蓝紫色 工作液紫外光谱与最大吸收 2 0 04 0 06 0 08 0 00 .00 .51 .01 .52 .02 .53 .0吸光度波长/nm519nm (50 μg/mL) 2 0 03 0 04 0 05 0 06 0 07 0 08 0 09 0 00 .00 .51 .01 .52 .0734nm吸光度波长/nm415nm（0.07mM (NH4)...