ELISA 方法的基本类型、用途及操作程序 酶联免疫吸附试验 (以下简称 ELISA) ：是酶免疫测定技术中应用最广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应板 ) 表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。常用的 ELISA 法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，后者用于测定特异抗体。 根据ELISA所用的固相载体而区分为三大类型：一是采用聚苯乙烯微量板为载体的ELISA，即我们通常所指的 ELISA（微量板 ELISA）；另一类是用硝酸纤维膜为载体的 ELISA,称为斑点 ELISA（Dot-ELISA）;再一类是采用疏水性聚脂布作为载体的 ELISA，称为布 ELISA（C－ELISA）。在微量板ELISA中，又根据其性质不同分为间接ELISA、双抗体夹心ELISA、双夹心 ELISA、竞争ELISA、阻断ELISA 及抗体捕捉ELISA。 1、间接 ELISA 本法主要用于检测抗体。以鸭病毒性肝炎（DVH）抗体的 ELISA 为例，间接 ELISA 的操作程序如下： (1) 材料 ① 包被液、洗涤液、保温液、底物液、终止液； ② DVH 包被抗原、酶标抗抗体、阴性及阳性 DVH 参考血清；待检鸭血清； ③ ELISA 检测仪、加样器、聚苯乙烯微量板。 (2) 方法步骤 ① 加抗原包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干 ② 加待检血清 → 37℃ 2 小时，洗涤三次、抛干 ③ 加酶标抗体 → 37℃ 2 小时，洗涤三次、抛干 ④ 加底物液 → 37℃ 30 分钟，加终止液 ⑤ 用ELISA 检测仪测定OD 值，并计算出P/N 比值。 (3) 结果判定 已知阳性血清与已知阴性血清的比值（P/N）≥2.1，而且已知阳性血清的OD值≥0.4；在上述条件成立的情况下，如果待检血清与已知阴性血清的比值（P/N）≥2.1，而且待检血清的OD 值≥0.4，则判为阳性，否则判为阴性。 2、双抗体夹心ELISA 本法主要用于检测大分子抗原。现以检测鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）的双夹心抗体ELISA 为例介绍本法的操作程序。 ① 加抗体包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干 ② 加待检抗原 → 37℃ 30 分钟，洗涤三次、抛干 ③ 加酶标抗体 → 37℃ 30 分钟，洗涤三次、抛干 ④ 加底物液 → 37℃ 15 分钟，加终止液 ⑤ 用ELISA 检测仪测定OD 值。 3、双夹心ELISA 此法与双抗体夹心ELISA 的主要区别在于：它是采用酶标抗抗体检查多种大分子抗原，它不仅不必标记每一种抗体，还可提高试验的敏感性。 此法的基本程序为...
