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PDS-1000 台式基因枪培训 一．基本用途：PDS-1000 台式基因枪采用高压氦气作为动力的粒子轰击技术将包埋DNA、大小约为0.6-1.6µ m 的微载体（微载体与亚细胞器的大小相当，一般是钨粉或金粉）加速到所需要的速度，从而将将外源分子导入细胞内，以达到转染的效果。该种方法可以对广泛的生物样品进行转染，如细菌、真菌、昆虫、植物以及各种动植物细胞等。与显微操作法相比，采用“基因枪”进行转染不仅操作更加简便、快速，而且适用于瞬时转染与稳定转染2 种常用转染方法。 二．基本原理介绍：PDS-1000 台式基因枪采用高压氦气作为动力（由破裂盘，ru ptu re disks控制释放）将含有 DNA 等外源分子（如DNA 等）包埋的微载体（Microcarries）的载体膜（Macrocarries）加速，载体膜被终止屏（Stopping Screens ）阻挡后微载体以很高的速度穿透细胞从而达到将外源分子导入细胞内部的目的。转染的效果取决于微载体的速度，而微载体的速度又取决于如下几个因素： 1． 氦气的压力，取决于不同压力的破裂盘（一共有 9 种规格） 2． 基因枪腔体内的真空度 3． 破裂盘和载体膜之间的距离（A） 4． 载体膜和终止屏之间的距离（B） 5． 终止屏和样品架即靶细胞之间的距离（C） 三．PDS-1000 台式基因枪安装前的准备（安装前需用户自备） 1． 交流变压器，具体参数：220V 转100V；功率大于500W 2． 氦气瓶，具体参数：氦气纯度99.995~99.999%；气瓶压力2000~2600 psi 3． 负压真空泵，具体参数：油式负压泵；流量90~150 升/分钟；预留英制4 分负压出口转接头；喉箍 四．PDS-1000 台式基因枪操作培训前的准备 1． 常规试剂：70%异丙醇、70%乙醇、100%乙醇、50%甘油、2.5M CaCl2、0.1M 亚精胺（组织培养级）、蒸馏水等 2． 常用仪器及耗材：60mm 组织培养皿、滤纸、1.5ml 离心管、离心机、涡旋震荡器、微量移液器等 3． 基因枪操作专用耗材：破裂盘（Rupture Disks）、载体膜（Macrocarries）、终止屏（Stopping Screens）、微载体（Microcarries） 五．PDS-1000 台式基因枪操作快速指南（在使用基因枪操作前，建议首先不使用微载体和靶细胞进行一次“dry run”，测试基因枪的气体通路一切正常后再进行实验） 轰击前的准备工作 1． 实验前清洗与灭菌（高压蒸汽灭菌）处理：破裂盘固定帽、微载体组件、载体膜及载体膜支架、终止屏 2． 采用70%乙醇对 PDS-1000 台式基因枪腔体进行灭菌处理并晾干。...