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C-Cbl介导IRF3泛素化负向调控抗病毒固有免疫中期报告

C-Cbl介导IRF3泛素化负向调控抗病毒固有免疫中期报告_第1页
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精品文档---下载后可任意编辑C-Cbl 介导 IRF3 泛素化负向调控抗病毒固有免疫中期报告中期报告概述:病毒性感染会触发宿主固有免疫反应,其中重要的事件是干扰素调节因子 3 (IRF3) 的激活和核移位,从而促进干扰素 (IFN) 的产生。C-Cbl 是一种 E3 泛素连接酶,已被证实可促进 IRF3 的泛素化并降解其稳定性。本讨论旨在探究 C-Cbl 对 IRF3 泛素化的负向调控作用,及其在抗病毒固有免疫中的作用。截至中期报告,我们已完成以下工作:1. 确定了 C-Cbl 与 IRF3 相互作用的区域。利用 GST pull-down 结果指出,C-Cbl 通过其 Ring 指结构域与 IRF3 的 C-末端相互作用,而这一区域也与其他 E3 酶的结合有关。更进一步的拮抗实验表明这一区域在正常状态下也能完整维持 IRF3 的稳定性,进一步支持 C-Cbl 对其的负向调控作用。2. 鉴定了 C-Cbl 介导的 IRF3 泛素化。在 HEK293T 细胞中重组表达 IRF3、C-Cbl、HA-泛素及各自的突变体。共表达三种蛋白的细胞经过 HA-抗体免疫共沉淀后检测泛素化程度。结果显示,C-Cbl 增加了 IRF3 泛素化水平,而其 Ring 指结构域突变体失去了这种作用。3. 讨论了 C-Cbl 对病毒感染后 IRF3 起始的放疗抗性激活和下游 IFN 反应的影响。通过体内和体外试验, 表明当细胞 C-Cbl 沉默或缺失时,IRF3 的激活和 IFN 的产生都增加了。反之,当过表达 C-Cbl 时, IRF3 的泛素化和稳定性降低, IFN 产生减少。总之,C-Cbl 通过促进 IRF3 的泛素化降解,从而负向调控抗病毒固有免疫反应。未来计划:我们将进一步讨论以下几个方面:(1)在生物体内更直接地考察 C-Cbl 的作用和机制;(2) 探究其他 E3 酶对 IRF3 的作用和 C-Cbl 与其他 E3 酶的关系;(3)分析 C-Cbl 对其他类型免疫反应的影响。

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