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DNA重组技术的基本工具

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精品文档---下载后可任意编辑“工欲善其事,必先利其器”。我国拥有自主知识产权的转基因抗虫棉,就是通过精心设计,用“分子工具”构建成的。培育抗虫棉首先要在体外对含有抗虫基因的 DNA 分子进行“切割”、改造、修饰和“拼接”,然后,导入棉花体细胞内,并使重组 DNA 在细胞中表达。实现这一精确的操作过程至少需要三种工具,即准确切割DNA 的“手术刀”、将 DNA 片段再连接起来的“缝合针”将体外重组好的 DNA 导入受体细胞的“运输工具”。科学家已经找到并运用了这三种必需的工具,才使培育抗虫棉这一奇异构想变成了现实(图 1-1)。图 1-1 抗虫棉(左侧为对比)寻根问底根据你所掌握的知识,你能推测这类酶存在于原核生物中的作用是什么吗?限制性核酸内切酶——“分子手术刀”切割 DNA 的工具是限制性核酸内切酶(restrictionendonucleases),又称限制酶(restrictionenzyme)。这类酶主要是从原核生物中分离纯化出来的。迄今已从近 300 种不同的微生物中分离出了约 4000 种限制酶。它们能够识别双链 DNA 分子的某种特定核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键(图1-2)断开。大多数限制酶的识别序列由 6 个核苷酸组成,例如,EcoRI、SmaI 限制酶识别的序列均为 6 个核苷酸,也有少数限制酶的识别序列由 4、5 或 8 个核苷酸组成。DNA 分子经限制酶切割产生的 DNA 片段末端通常有两种形式—黏性末端和平末端(图 1-3)。当限制酶在它识别序列的中心轴线(图中虚线)两侧将 DNA 的两条链分别切开时,产生的是黏性末端,而当限制酶在它识别序列的中心轴线处切开时,产生的则是平末端。生物技术资料卡限制酶的名字怎么起?限制酶的名字是怎么起的呢?是用生物属名的头一个字母与种名的头两个字母,组成了 3 个字母的略语,以此来表示这个酶是从哪个生物中分离出来的。例如,一种限制酶是从大肠杆菌(Escherichia coli)的 R 型菌株分离来的,就用字母 EcoR 表示;假如它是从大肠杆菌 EcoRI 。DNA 连接酶——“分子缝合针”将切下来的 DNA 片段拼接成新的 DNA 分子,是靠 DNA 连接酶来完成的。1967 年,世界上几个实验室几乎同时发现了一种能够将两条 DNA 链连接起来的酶,称之为 DNA 连接酶(DNAligase)。根据酶的来源不同,可以将这些酶分为两类:一类是从大肠杆菌中分离得到的,称为 E·coliDNA 连接酶;另一类是从 T4噬菌体中分离出来的,称为 ...

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