精品文档---下载后可任意编辑H2S 激活 AMPK-mTOR 通路诱导肝细胞自噬改善TG 代谢的实验讨论的开题报告一、讨论背景脂肪代谢紊乱是导致非酒精性脂肪肝（NAFLD）的重要原因。自噬是一种重要的代谢调节途径，参加维持细胞的稳态和清除受损或有害的蛋白质和细胞器，其异常调节与多种代谢性疾病的发生有关。讨论表明，一氧化氮（NO）和硫化氢（H2S）等气体分子可以调节自噬通路，从而改善脂代谢紊乱的病理过程。具体来说，NO 能够激活 AMPK-mTOR 信号通路促进自噬，进而降低脂肪合成和提高脂肪酸氧化，降低脂肪形成；而 H2S 也有类似的作用。二、讨论目的该讨论旨在探究 H2S 能否通过激活 AMPK-mTOR 通路促进肝细胞自噬，从而改善脂代谢紊乱，降低肝脏中三酰甘油（TG）的含量。三、讨论内容和方法1. 细胞培育和处理利用原代培育的小鼠肝细胞（PMH）为实验对象，以细胞数目和生长状况均匀的细胞进行实验。将细胞分为 5 组：对比组、H2S 处理组（50 μM）、AMPK 激活剂组、mTOR 抑制剂组和 H2S 联合 AMPK 激活剂组。细胞预处理 24 h 后，再分别加入相应的处理剂，并继续培育24 h。2. 检测肝细胞自噬采纳免疫荧光染色法检测自噬体在细胞中的形成情况。将细胞划分为对比组和 H2S 处理组，使用 GFP-LC3 转染技术观察自噬小体的形成。利用激光共聚焦显微镜观察细胞内的自噬小体数量及分布情况。3. 检测 TG 合成及分解相关蛋白表达Western blot 检测细胞及组织中的AMPK、mTOR、ACC、ATGL、FAS 和 SREBP-1 等相关蛋白的表达水平，并采纳气相色谱法检测 TG 含量。四、讨论预期结果精品文档---下载后可任意编辑估计本讨论能够证实 H2S 能够通过激活 AMPK-mTOR 通路诱导肝细胞自噬的形成，并进一步促进 TG 代谢，改善脂肪代谢紊乱，为NAFLD 的治疗提供新的策略和方向。
