精品文档---下载后可任意编辑hSHIP 负调 PI3KAKt 信号通路对 HeLa 细胞增殖与凋亡的影响的开题报告一、背景PI3K/AKT 信号通路在细胞的增殖、存活、代谢等过程中起重要作用。其中，PI3K 是活性酶，在促进 Akt 磷酸化的同时，能够催化 PIP2 为PIP3 的转化，该转化反应是 PI3K/AKT 信号通路的启动步骤。而 AKT 被激活后能够开启多种信号通路，影响各种生物学过程。过去的讨论表明，PI3K/AKT 信号通路的异常激活与许多癌症的发生有关。因此，阻断PI3K/AKT 信号通路已成为癌症治疗的重要途径。鉴于 PI3K/AKT 信号通路与肿瘤的关系，讨论这一信号通路在癌细胞增殖和凋亡中的作用是至关重要的。当前，对 PI3K/AKT 信号通路进行分子调控的方法包括靶向 PI3K/AKT 信号通路的特定药物和使用 RNAi 技术抑制相关基因表达。其中，AKT 小分子抑制剂比较常用，但是其小分子特点注定了不能做片段，对于药理讨论和剂量依赖性讨论难度大。而RNAi 技术由于消耗能量大，目前尚未实现对许多靶点的有效抑制，因此也有一定的局限性。二、讨论目的本讨论旨在通过构建 HeLa 细胞 PI3K/AKT 信号通路负调控模型，系统分析该信号通路在癌细胞生长和凋亡中的作用及其调节机制。三、讨论方法（1）实验材料HeLa 细胞PI3K 抑制剂 wortmannin、AKT 抑制剂 MK-2206（2）实验方法1. HeLa 细胞培育将 HeLa 细胞培育在 DMEM 培育基中，含 10% FBS 和 1%PSA。在 37℃和 5% CO2 条件下培育细胞直至细胞密度适宜。2. 药物处理精品文档---下载后可任意编辑将 HeLa 细胞随机分为四组，对比组、wortmannin 组、MK-2206组和 wortmannin + MK-2206 组，分别加入不同浓度的药物后培育相应时间。3. 细胞增殖实验通过 MTT 法检测 HeLa 细胞的增殖情况，并计算药物对 HeLa 细胞增殖的影响。4. 细胞凋亡实验采纳流式细胞仪检测每组细胞的凋亡率，并进行统计学分析。四、预期结果本讨论预期结果为：PI3K 抑制剂 wortmannin 和 AKT 抑制剂 MK-2206 分别对 HeLa 细胞增殖和凋亡产生显著的影响，同时服用wortmannin 和 MK-2206 药物组的细胞可以对抗两种药物的作用。该结果将有助于理解 PI3K/AKT 信号通路在癌细胞生长过程中的作用机制，并为癌症治疗提供新的思路。
