精品文档---下载后可任意编辑MCF7 细胞中 haS-miR-103 靶向 CARM1 基因的初步讨论的开题报告一、讨论背景及意义乳腺癌是指一类在乳腺组织内恶性生长的癌症，已成为全球女性最常见的恶性肿瘤之一。其中，人类乳腺癌细胞株 MCF7 作为经典的乳腺癌细胞株，在乳腺癌的发病机制和治疗讨论中得到了广泛应用。CARM1（coactivator-associated arginine methyltransferase 1）是一种类型 I 基因家族中的组蛋白辅助修饰酶，存在于细胞核中，在RNA 转录、转录后修饰和染色质结构修饰等过程中发挥重要作用。讨论表明，CARM1 在多种肿瘤中高表达，如乳腺癌、肺癌、子宫内膜癌、胰腺癌等。因此，讨论 CARM1 异常表达的调控机制有助于乳腺癌的早期诊断和治疗。微 RNA 是一种重要的调控元件，能与 mRNA 互相作用，并通过RNA 诱导靶向细胞凋亡、增殖、分化、应激反应等功能。讨论表明，haS-miR-103 在多种肿瘤中异常表达，包括乳腺癌，同时其也能够影响细胞的生理过程。综上考虑，本讨论旨在探究在 MCF7 细胞中，haS-miR-103 是否可以通过靶向调控 CARM1 基因表达来对乳腺癌的发病及治疗产生影响。二、讨论目的1.检测 MCF7 细胞中 haS-miR-103 的表达水平；2.利用文献报道的方法构建靶向 CARM1 基因的 haS-miR-103；3.检测构建后的靶向 CARM1 基因的 haS-miR-103 对 MCF7 细胞增殖、凋亡及迁移的影响；4.初步探究 haS-miR-103 通过 CARM1 基因在 MCF7 细胞中的调控机制。三、讨论方法1.细胞培育：采纳 MCF7 人乳腺癌细胞系，采纳 DMEM 培育基（含10%胎牛血清）进行培育。2.表达水平检测：利用逆转录实时荧光定量 PCR，检测 MCF7 细胞中 haS-miR-103 表达水平。精品文档---下载后可任意编辑3.基因突变：利用 GenePharma 公司提供的工具构建靶向 CARM1基因的 haS-miR-103。4.增殖实验：利用 MTT 法检测不同处理组 MCF7 细胞的增殖速率。5.凋亡分析：采纳 Annexin V-PE/7-AAD 两染色法检测细胞凋亡情况。6.细胞迁移实验：采纳 Transwell 实验检测细胞迁移的能力。7.相关基因蛋白的检测：采纳 Western blot 检测 MCF7 细胞中CARM1、E-cadherin、N-cadherin 的表达水平。四、预期结果1.在 MCF7 细胞系中探究 haS-miR-103 表达水平；2.利用文献报道的方法构建靶向 CARM1 基因的 haS-miR-103；3.检测构建后的靶向 CARM1 基因的 haS-miR-103 对 MCF7 细胞增殖、凋亡及迁移的影响；4.初步探究 haS-miR-103 通过 CARM1 基因在 MCF7 细胞中的调控机制。
