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实验一糖和蛋白质的理化性质检验

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实验一 糖和蛋白质的理化性质检验 (4 学时) 第一部分 蛋白质的理化性质 第一节 蛋白质的颜色反应 一、实验目的 掌握鉴定蛋白质的原理和方法。 二、实验原理 蛋白质分子中的某种或某些基团与显色剂作用,可产生特定的颜色反应,不同蛋白质所含氨基酸不完全相同,颜色反应亦不同。颜色反应不是蛋白质的专一反应,一些非蛋白物质亦可产生相同颜色反应,因此不能仅根据颜色反应的结果决定被测物是否是蛋白质。颜色反应是一些常用的蛋白质定量测定的依据。 三、实验器材与试剂 实验器材 1. 鸡蛋1 个 2. 吸管 1.0mL(×1) 3. 试管 1.5cm×15cm(×2) 4. 试管架 5. 试管夹 2 个 6. PH 试纸(5-7) 7. 水浴锅 实验试剂 1. 卵清蛋白液:将鸡(鸭)蛋白用蒸馏水稀释20-40 倍,离心,上清液冷藏备用。 2. 1%茚三酮溶液: 1g 茚三酮溶于 95%乙醇并稀释至 100mL。 3. 浓硝酸: 比重 1.42。 4. 10%NaOH 溶液:10gNaOH 溶于蒸馏水,稀释至100mL。 四、实验方法 A. 黄色反应 蛋白质分子中含有苯环结构的氨基酸(如酪氨酸、色氨酸等)。遇硝酸可硝化成黄色物质,此物质在碱性环境中变为橘黄色的硝苯衍生物(苯及苯丙氨酸较难硝化,需用浓硫酸促进之。反应如下: 操作方法:于一试管内,置蛋白质溶液10 滴及浓硝酸 5 滴,加热,冷却后再加 10%NaOH 溶液20 滴,观察颜色变化。 B. 茚三酮反应 蛋白质与茚三酮共热,则产生蓝紫色的还原茚三酮、茚三酮和氨的缩合物。此反应为一切蛋白质及a-氨基酸所共有。含有氨基的其他物质亦呈此反应。亚氨基酸(脯氨酸和羟脯氨酸)与茚三酮反应呈黄色。 操作方法:取 1mL 蛋白质溶液置于试管中,加 3-5 滴茚三酮试剂,加热至沸,即有蓝紫色出现。 注意:此反应必须在 pH5-7 进行。 C .双缩脲反应(参考实验) 将尿素加热,两分子尿素放出一分子氨而形成双缩脲。双缩脲在碱性环境中,能与硫酸铜结合成红紫色的络合物,此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中含有肽键与缩脲结构相似,故能呈此反应(双缩脲反应可用以鉴定蛋白质是否完全水解,及用比色法作蛋自质之定量测定)。其反应式如下: 操作方法: 1. 取少许结晶尿素放在干燥试管中,微火加热,尿素熔化并形成双缩脲,释出之氨可用红色石蕊试纸试之。至试管内有白色固体出现,停止加热,冷却。然后加10%NaOH 溶液 1m L 摇匀,再加2 滴 1%硫酸铜溶液,混匀,观察有无紫色出现。 2....

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