实验五聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分析小麦幼苗过氧化物酶同工酶(实验报告)

1 生物化学实验报告 实验五 聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分析 小麦幼苗过氧化物酶同工酶 一、研究背景及目的 电泳现象就是带电粒子在电场中向与其自身带相反电荷的电极泳动。电泳技术最初是由瑞典的著名科学家Tisellius 所奠基，自此生物大分子的分离纯化便进入了电泳技术的新纪元。电泳技术的发明是人们在分离纯化技术中的“差异转换”思路上又一次伟大的飞跃。人们清楚地意识到，要想使目标物得到分离，目标物与杂质之间的性质差异必须足够大，这又与某些性质差异小的物质的分离相矛盾，而人为放大这些差异小的性质必然会破坏目标物的原有结构，因此需要借助第三者进行差异转化，即以其自身的性质为基础，转化为其他方面差异大的性质。电泳技术就是利用一些生物大分子的电性特点，在一定的条件下使被分离物之间很小的差异转化为自身所带电荷性质与数量的差异，在外加电场的作用下便会体现出迁移方向及速度上的差异，通过时间上的积累进而体现为迁移距离的差异。最初的电泳技术是在溶液中进行的自由电泳，后来人们想到，由于待分离物的大小、形状也存在差异，那么它们在电场中泳动的过程中必然会受到不同的阻力，这种阻力的差异又转化为了电场中迁移速度的差异，所以人们便发明了各种用于电泳的载体（支持介质），使分子的大小及形状差异得以转化和体现，大大提高了分辨率。至此，电泳技术的基本理论就建立了。此后，在实际操作中，人们不断进行探索、改进与完善，发明了诸多的电泳新技术，使电泳成为一项生物大分子分离纯化中令人瞩目的研究技术。 本实验基于电泳的基本原理对小麦过氧化物酶同工酶进行分离，旨在学习并掌握电泳技术的发明历程以及操作过程中的相关细节，同时更为深刻地理解一项新技术在实际应用中不断修正与完善的过程，体会电泳和层析两大技术各自的特点和优势。 二、原理[1] 1.过氧化物酶同工酶 同工酶是催化同一种化学反应，但其酶蛋白本身的分子结构组成却有所不同的一组酶。它们与生物的遗传、生长发育、代谢调节及抗性等都有一定关系，测定同工酶在理论上和实践上都具有重要的意义。本实验测定的过氧化物酶同工酶是植物体内普遍存在的、活性较高的一种酶，它与植物的光合、呼吸作用以及生长素的氧化等有关；在植物生长发育过程中它的活性不断发生变化。因此，测定过氧化物酶同工酶的生物活性可以了解某一时期植物体内代谢的变化。 2.电泳的基本原理 带电粒子在电场中的泳动速度有以下公式： v = ᵃᵅ6ᵰᵯᵰ...