我们实验室用的银染方法VIP专享

我们实验室用的银染方法 1.50%甲醇浸泡 15 分钟(置于摇摆床上 ,以下省略,本步骤两次 ,每 15 分钟更换一次) 2.10%甲醇浸泡 10 分钟 3.水漂洗 3 次,每次数秒 4.2μM DTT 溶液浸泡 20 分钟 5.0.1%硝酸银溶液浸泡20 分钟 6.水漂洗 3 次,每次不超过15 秒(每次约 150ML) 7.显色液漂洗3 次,每次不超过15 秒(每次约 100ML) 8.显色液浸泡显色至看到目的蛋白带(约 200ML) 9.10G 柠檬酸定影 显色液:15G 无水碳酸钠溶于 500m l 水,用前加入 250μL福尔马林搅拌均匀 水用双蒸水就可以,纯度越高越好,其他试剂用分析纯,据书上说甲醇用化学纯的比分析纯更灵敏 此方法出自冷泉港蛋白质技术指南(实际上是其蛋白质技术会议的总结)灵敏度稍低于分子克隆上老方法,但是非常方便,也比其他方法快速,只需要1.5 小时,我染出来的胶非常漂亮,有需要的话可以上传给大家看看 一般来说，高背景是由于杂质产生的，银染的水质很重要，最好要用去离子水或双蒸水，装胶的器皿也一定要洗得很干净。固定、银染之后均需充分的漂洗。 其实银染就是银镜反应，可能是你的样品浓度高，所以白了，浓度更高还会变成一条能反光的带。固定时间不需加长，我有时来不及还减少固定时间，银染关键是器皿和溶液干净，显色前胶一定要漂干净 大板本来效果就差点，浓度越大，条带形状越差，这也很正常，银染薄点的胶效果要好些，因为染的是表面的蛋白 1. 取下凝胶,蒸馏水冼胶30 秒. 2. 0.1% 硝酸银染色 10 分钟. 3. 弃去染色液,蒸馏水洗胶1 分钟. 4.显色液显色15 秒,换用新的显色液 ,显清条带为止 . 显色液配方 : 10 克氢氧化钠+0.2 克碳酸钠+2m甲醛溶液,定溶到 500m l. 这个染色方法挺好的,我用过.注意染色时间不能长. 材料没什么要求，玻璃会更好一点，但不好搞到，我们是见到什么大小合适就用什么。 液体的量一般是胶体积的 5 倍，比如 13× 13× 0.1cm 的胶，用一百 ml 一定够，80 也行。 我的经验是：1.取下凝胶用去离子水冼胶30 秒三次， 2.0.1% 硝酸银染色10 分钟. 3.弃去染色液,蒸馏水洗胶1 分钟（换2 次去离子水） 4.显色液显色15 秒,换用新的显色液 ,显清条带为止 .不要试图将所有的条带都显出来， 要求越高可能导致背景就深， 5.染色后要用固定液（冰乙酸）终止染色， 6.固定 3 分钟后再用去离子水洗涤2 遍（整个试验比较费去离子水）。 我的做法是这样的，染色效果还可以 10%的乙醇固定1...