在测定维生素C的国标方法中

在测定维生素 C 的国标方法中，荧光法为测定食物中维生素 C 含量的第一标准方法,2,4—二硝基苯肼法作为第二法.一,荧光法1.原理样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后，与邻苯二胺(OPDA)反应生成具有荧光的喹喔啉(quinoxaline)，其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比，以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量.脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与 OPDA 反应，以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰.本方法的最小检出限为 0.022g/ml.2.适用范围GB12392-90 本方法适用于蔬菜，水果及其制品中总抗坏血酸的测定3.仪器3.1.实验室常用设备.32 荧光分光光度计或具有 350nm 及 430nm 波长的荧光计.3.3.打碎机.4.试剂本实验用水均为蒸馏水，试剂不加说明均为分析纯试剂.(1) 偏磷酸一乙酸液：称取 15g 偏磷酸，加入 40ml 冰乙酸及 250ml 水，搅拌，放置过夜使之逐渐溶解,加水至 500ml.4°C 冰箱可保存 7〜10 天.(2) 0.15mol/L 硫酸：取 10ml 硫酸，小心加入水中,再加水稀释至 1200ml.(3) 偏磷酸一乙酸一硫酸液：以 0.15mol/L 硫酸液为稀释液,其余同 4.1.配制.(4) 50%乙酸钠溶液：称取 500g 乙酸钠(CH3COONa・3H2O)，加水至 1000ml.(5) 硼酸-乙酸钠溶液：称取 3g 硼酸，溶于 100ml 乙酸钠溶液(4.4)中•临用前配制.(6) 邻苯二胺溶液：称取 20mg 邻苯二胺，于临用前用水稀释至 100ml.(7) 0.04%百里酚蓝指示剂溶液：称取 0.1g 百里酚蓝，加 0.02mol/L 氢氧化钠溶液，在玻璃研钵中研磨至溶解,氢氧化钠的用量约为 10.75ml,磨溶后用水稀释至 250ml.变色范围：pH=1.2 红色pH=2.8 黄色pH〉4.0 兰色（8）活性炭的活化：加 200g 炭粉于 1L1+9 盐酸中，加热回流 1~2h,过滤，用水洗至滤液中无铁离子为止，置于 110〜120°C 烘箱中干燥,备用.（9）标准抗坏血酸标准溶液（1mg/ml）：准确称取 50mg 抗坏血酸,用溶液（4.1）溶于 50ml 容量瓶中，并稀释至刻度.抗坏血酸标准使用液（100 遽/ml）:取 10ml 抗坏血酸标准液,用偏磷酸-乙酸溶液稀释至 100ml.定容前试 pH 值，如其 pH〉2.2 时，则应用溶液（4.3）稀释.标准曲线的制备：取下述"标准"溶液（抗坏血酸含量 10gg/ml）0.5,1.0,1.5 和 2.0ml 标准系列,取双份分别置于10ml 带盖试管中，再用水补充至 2.0ml.5.操作步骤5.1 样品制备全部实验过程应避光.称取 100g 鲜样，加 100g 偏磷酸-乙酸溶液，倒入打...