活性维生素D3通过nephrin-PI3KAkt信号通路对阿霉素肾病大鼠足细胞损伤的影响论文设计

摘 要目的：人类慢性肾脏病（CKD）病例起源于肾小球，它是形成原发尿的过滤器，肾小球选择性过滤过程很大程度上取决于足细胞的结构完整性和功能能力。足细胞表面核心蛋白 nephrin 是其中央信号平台，发挥信号传递作用。越来越多证据表明维生素 D 及其类似物发挥独立于钙磷代谢之外的肾保护作用，其对足细胞作用的报道较少，以及足细胞损伤的机制还没有定论。所以，我们探究活性维生素 D3（AVD3）对足细胞损伤和 PI3K/Akt 通路的影响，挖掘其发挥作用的潜在机制。方法：1. 健康 6 周龄雄性 SD 大鼠随机分为对照组（NC 组）、阿霉素肾病模型组（AN 组）、阿霉素肾病活性维生素 D3（0.25µg/kg/d）干预组（AN+AVD3组），每组 36 只。造模大鼠（AN、AN+AVD3 组）单次尾静脉注射阿霉素（ adriamycin,ADR,7.5mg/kg），以大量蛋白尿、肾功能障碍以及肾病理损伤为实验标准，实验时长达 10 周。每 2 周测定各组大鼠不同时期内各项指标，包括：体重、肾脏系数、肾功能指标、肾病理损伤；免疫荧光观察 nephrin、desmin、PI3K（p85α）及 p-Akt 在肾小球中的定 位 ， 免 疫 组 织 化 学 半 定 量 和Western Blot定 量 分 析nephrin、desmin、PI3K（p85α）、AKT 及 p-Akt 蛋白表达水平，实时荧光定量PCR（qPCR）检测 nephrin、desmin、PI3K（p85α）及 AKT mRNA 水平。2. 将体外培养的大鼠足细胞分为：正常对照组（NC 组）、单纯 1,25-二羟维生素 D3组（10nmol/L, AVD3组）、ADR 足细胞损伤模型组（1.5µmol/L, ADR 组）和 1,25-二羟维生素 D3干预组（1.5µmol/L ADR +10nmol/L AVD3, ADR+AVD3组）；大鼠形态学，免于荧光鉴定大鼠足细胞；MTT 法检测 ADR 对足细胞细胞活力的抑制作用，AVD3 对足细胞细胞活力的保护效应；Western Blot 检测不同浓度 ADR、AVD3 对nephrin 蛋白表达的影响；Western Blot 检测 AVD3 对 ADR 刺激下损伤足细胞desmin、nephrin、PI3K（p85α）、AKT 及 p-Akt 蛋白表达的影响。结果：第一部分：活性维生素 D3对 AN 大鼠足细胞损伤和 PI3K/Akt 通路的影响1.1 AN 大鼠模型评价与 NC 组比，造模组(AN、AN+AVD3组)大鼠出现一般体征和精神异常：毛色蓬乱暗黄、多尿便稀、喜蜷缩、易激惹；造模大鼠产生大量蛋白尿（>30mg/100g）和肾表型异常：肾小囊囊腔增宽、基底膜增厚、肾小管上细胞脱落及肾间质炎性浸润等。1.2 AVD3对 AN 大鼠肾保护...