急性创伤性深静脉血栓消退与不消退差异表达基因研究

急性创伤性深静脉血栓消退与不消退差异表达基因讨论中文摘要目的：在建立大鼠急性创伤性肢体深静脉血栓动物模型基础上，应用Affymetrix 基因芯片技术，从基因水平讨论血栓形成后，消退与不消退两种不同病理过程间股静脉中差异表达基因，探究影响创伤性肢体深静脉血栓消退的部分关键因素。方法：1. 分组：250 只 SD 大鼠（雌雄不限）随机取 20 只作为对比组，余 230 只据创伤造模后血栓形成病理变化过程分为：创伤即刻组（B 组，造模后 0.5 小时）、血栓形成前期组（C 组，造模后 2.5 小时）、血栓形成高峰期组（D 组，造模后 25 小时）、血栓消退期组（E 组，造模后 72 小时）、血栓不消退组（F 组，造模后 72 小时）和血栓不形成组（G 组，造模后 72 小时）。2. 造模：对比组大鼠不造模，创伤组大鼠造模时不行麻醉，造模方法为：双侧腹股沟区碘伏液消毒后行侧切口，长约 1cm，暴露出股动、静脉与股神经，稍作钝性分离显露长约 1.5cm 的股静脉，用 12.5mm 全齿蚊式血管钳分三段各钳夹血管 1 次（力量为血管钳紧 1 扣，每次持续 3 秒）后，用 1 号丝线全层间断缝合皮肤切口，不放置引流，除对比组、创伤即刻组外大鼠均行双后肢髋人字石膏固定；造模后观察大鼠双足颜色和肿胀情况。3. 取材方法：对比组大鼠不造模即取材，创伤即刻组于造模后 0.5 小时，其余各组大鼠在相应时相点沿原切口暴露股静脉，观察血栓形成状态，符合分组标准后，用 3％的戊巴比妥钠溶液按 1ml/kg 体重，腹腔注射麻醉，仰卧位固定，碘伏液消毒双后肢前侧皮肤区域后，沿双侧股静脉走行切开皮肤约4.5cm，观察局部组织反应、股静脉血栓是否形成、严重程度与消退、不消退情况，分别记录；显微镜下分离并切取双侧各长约 4.5cm 的股静脉与主要属支，留长约 0.5cm 的血管用甲醛固定，送 HE 染色组织切片镜检；0.9%生理盐水冲洗洁净血管中的血液或血栓，离体 30 秒放入冻存管，置入液氮罐中保存，用于总 RNA 提取。4. 总 RNA 提取：TRIzol 法分别提取上述 7 组股静脉标本总 RNA；各组总 RNA 样品经琼脂糖凝胶电泳检测合格后（28SRNA 和 18SRNA 条带整齐，两者带宽比值超过 2 倍）分为两份，一份送以进行基因芯片检测，另一份备用以行 RT-PCR 检测。5.芯片与 RT-PCR 检测：按 Affymetrix RAT 230A 表达谱芯片操作流程，经 cDNA 探针制备、杂交、洗脱、染色、扫描，完成芯片检测；应用 RT-PCR技术检...