卡他莫拉菌快速鉴定及耐药性分析材料和方法(1)材料2.培育基:5%羊血琼脂培育基(SBA),5%兔血巧克力琼脂培育基(RChoc),5%羊血巧克力琼脂培育基(SChoc),含 50µg/ml 万古霉素的兔血巧克力琼脂培育基(Choc—V),淋病奈瑟菌培育基(NGA),MH 培育基(MHA),5%羊血 MH 培育基(MHB),脑心琼脂培育基(BCA),营养琼脂培育基(NUA),中国蓝琼脂培育基(ZLA),DNA 琼脂培育基均为本室自制。3.试剂:蛋白胨、DNA 琼脂粉、MH 琼脂粉、VlTEK-(NHI 和 GNI)鉴定试卡购自生物梅里埃公司。万古霉素为英国 BD 公司产品,盐酸四甲基对苯二胺、3 一乙酰吲哚购自 SIGMA 公司,Nitrocefin 购自 O 某 OID 公司(英国)。氧化酶纸片(1%盐酸四甲基对苯二胺溶液浸泡纸片后吹干备用),乙酰酯酶纸片(100mg/ml3.乙酰吲哚丙酮溶液浸泡 50 片纸片后吹干备用)[3],Nitrocefin 纸片(12.5µg/片,Nitrocefin 吹干备用)。4.抗生素:哌拉西林(PIP);氨苄西林(AMP),哌拉西林/舒巴坦(PIPC/SBT)(4:1),哌拉西林/他唑巴坦(PIP/TAZ)(8:1),氨苄西林/舒巴坦(AMP/SBT)(2:1),头孢哌酮/舒巴坦(CFP/SBT)(1:1),亚胺培南/西司他丁(M/CST)(1:1),均购于英国 BD 公司。(2)方法1.菌株分离与鉴定:将可疑标本接种于 SBA 和 Choc-V 琼脂平板上,置 5%C02 孵箱,35℃培育 24-72h 观察结果。细菌的分离培育和鉴定按文献[4]进行,分离到的菌株经涂片革兰染色镜检、触酶、氧化酶试验后,用 VlTEK(NHI 和 GNI)鉴定试卡鉴定到种。2.氧化酶试验:按文献[4]进行。3.DNA 酶试验:按文献[4]进行。4.乙酰酯酶试验:用无菌生理盐水将 3-乙酰吲哚纸片沾湿,取待检菌落涂在纸片上,3min 内出现蓝绿色为阳性反应。5.β-内酰胺酶试验:用无菌蒸馏水将 Nitrocefin 纸片沾湿,取 MC菌落涂在纸片上,5min 内纸片变红色者判为 B 内酰胺酶阳性。6.药敏试验:根据美国临床实验室标准化委员会 2024 年版标准,采纳琼脂平皿二倍稀释法测定最低抑菌浓度(MIC),用多点接种仪定量种菌。二、结果1.氧化酶试验:114 株 MC、8 株淋病奈瑟菌、2 株脑膜炎奈瑟菌、76株奈瑟菌、12 株莫拉菌、3 株博德特菌氧化酶均为阳性,79 株不动杆菌氧化酶为阴性。2.DNA 酶试验:114 株 MC、8 株淋病奈瑟菌、2 株脑膜炎奈瑟菌、76株奈瑟菌、12 株莫拉菌、3 株博德特菌氧化酶均为阳性,79 株不动杆菌DNA 酶均为阴性...