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《细胞工程》第4章(3)动物细胞培养工程4

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细胞工程Cell EngineeringChapter 4 、动物细胞培养工程 4 . 1 概述 4 . 2 生产用动物细胞系4 . 3 培养液和培养环境4 . 4 动物细胞培养工艺4 . 5 动物细胞培养过程的放大与优化4 . 6 动物细胞代谢工程4 . 7 动物细胞工程产品制备及质控4 . 8 动物细胞工程表达产品的应用4 . 5 动物细胞培养过程的 放大与优化4 . 5 . 1 动物细胞培养工艺的研究A 、开发重要性: 真核细胞表达产物糖基化,有疗效; 动物细胞体外培养广泛应用于基因工程蛋白质与病毒疫苗等生产;动物细胞表达产品十分昂贵,开发周期长,研发成本高,技术难度大;如:美国, Immunex公司,已被 Amgen 公司兼并,生产治疗风湿性关节炎蛋白药物, 2.6g/ 人、年 ×6154 美元 /g=16000 美元, 2002年,销售额达 8.02 亿美元,其中,被替代损失 10 亿,因为产量低,计划投入数亿美元,耗时 3-5 年,扩大规模、优化生产工艺,提高产量。B 、主要内容: 生产工艺的放大、生产工艺的稳定性和重复性。C 、初步研究: 首先必须较快建立一个基本(不要求是最优)的细胞培养工艺。4 . 5 . 2 动物细胞培养工艺的优化A 、影响蛋白质产量的关键参数, 营养物耗尽;B 、决定细胞浓度 有毒废物的积累 的关键参数 培养物理条件的恶化 提高蛋白质表达水平C 、细胞培养工艺 细胞新陈代谢的控制 优化策略 流加工艺的优化4 . 5 . 3 动物细胞培养工艺的放大A 、生物反应器尺寸放大 鼓泡B 、氧气的传输 提高氧气传递的其它方法 搅拌速率和搅拌器的设计C 、混合 剪切力和细胞损伤D 、工业生产中的动物细胞培养 4 . 6 动物细胞代谢工程4 . 6 . 1 概述 A 、生命的代谢活动是通过活细胞和细胞群的代谢网络进行的,后者由一系列酶催化的级联化学反应以及特异性的膜转移系统所构成。然后,活细胞这种自身固有的代谢网络相对实际应用而言,其遗传特性并非最佳,需要对细胞代谢途径进行修饰;B 、代谢控制发酵( metabolic control fermentetion )—— 是指利用遗传学或生物化学方法,人为地在 DNA 分子水平上改变和控制微生物的代谢,使目的产物大量的生成、积累的发酵;C 、在代谢控制发酵的理论基础上,提出和形成了“代谢工程”概念;D 、代谢工程(也称途径工程, pathway engineering )—— 是指应用重组 DNA 技术和分析生物学相关的遗传学手段进行有精确目标的遗传操...

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