甘油的检测方法汇总VIP免费

甘油的检测方法汇总在发酵行业中，甘油作为底物，是发酵液中生物合成的直接前体，会影响外源蛋白的启动表达效率，其含量的高低直接影响产物的发酵单位，是决定菌种取舍的重要指标，是提高工程菌的发酵密度，提高产品生产率的关键。在生物柴油生产中，它是副产物，其含量直接影响生物柴油的使用性能，是衡量生物柴油产品品质的重要指标之一。此外，甘油能与水结合以防止红细胞的冷冻损伤，能延长红细胞的保存期，被普遍用作细胞内冷冻保护剂等。由于甘油用途很广，因此其含量的测定具有非常重要的意义。目前国内外甘油含量的测定方法较多，主要有高碘酸氧化法、Cu2+络合比色法、酶比色法法、紫外-可见分光光度法、高效液相色谱法、气相色谱法、近红外光谱法以及原子吸收法等。下面将对其进行简要概述：一、高碘酸法1.原理：高碘酸氧化法是目前常见用于甘油含量检测的方法，利用高碘酸与甘油发生氧化还原反应，剩余高碘酸及反应生成的碘酸与碘化钾反应生成碘，再用硫代硫酸钠进行滴定，根据消耗的硫代硫酸钠的量来计算甘油的含量。2.操作步骤准确发酵液10ml于100mL小烧杯中，加少量水溶解，然后转移至100mL容量瓶中，用水稀释至标线，摇匀，静置。用移液管准确移取10mL上述溶液于碘量瓶中，加入20mL高碘酸钠溶液，混合均匀后，于黑暗中避光静置40min，然后加入碘化钾溶液和20%盐酸溶液各15mL，调节pH值在0.8～1.0之间，然后用硫代硫酸钠标准溶液滴定，近终点时，加入2mL淀粉指示剂溶液，继续滴定至溶液蓝色消失。同时做试样空白。3.计算：式中：w——样品中甘油的含量，％；V1——空白试样消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积，mL；V2——试样消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积，mL；C——硫代硫酸钠标准溶液的浓度，mol／L；M——甘油相对分子质量；二、酶比色法1.原理：它是利用酶的特异性催化反应建立的测定甘油的一种酶学方法，是指甘油在甘油激酶作用下转化为3-磷酸甘油，后者由磷酸甘油氧化酶催化生成磷酸二羟丙酮和过氧化氢，然后过氧化氢和4-氨基安普比林、4-氯酚在过氧化物酶催化下反应生成紫兰色、能在500nm左右有特征吸收峰的醌亚胺，通过颜色深浅即吸光度的变化测定所生成的H2O2，甘油的含量与生成的H2O2成正比，这样用比色法就可以测定甘油的含量。2.操作步骤波长：500nm(480~520nm)反映温度：37℃比色杯光径：1cm取一定量R1(参看R2瓶签)加入1瓶R2中，溶解后即为工作液，工作液预先保温至测试温度。空白管校准管样品管工作液1ml1ml1ml蒸馏水0.0100标准品0.01样品000.01分别混合均匀，在反应温度保温10分钟，以试剂空白管校零，记录校准及样品OD值。3.计算：甘油浓度=A样品/A校准×校准浓度（mmol/L或mg/dl）三、高效液相色谱法1.原理：高效液相色谱法(HPLC)的原理是以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，利用色谱柱对待测混合物先进行分离，然后再进行检测，从而实现对试样的分析，因而其测量的准确性和精确度较高，目前已成为检测生化分子较常用的一种方法。2.操作步骤（1）首先用水将发酵液稀释2.5倍,然后加H3PO4调pH至5.5,在转速8000r/min、温度4℃下离心10min,经微孔滤膜过滤用于HPLC分析；（2）将甘油标准系列溶液在最佳色谱条件下进行HPLC分析,以峰面积外标法定量得到甘油标准曲线；（3）按照样品预处理方法处理后进样5微升,记录峰面积,代入线性方程中,计算其测定值。将计算值乘以稀释倍数后,即得发酵液中甘油的含量。四、气相色谱法1.原理：气相色谱分析法是用于分离分析复杂样品中的化合物的一种方法，其原理是一定量的气体或液体分析物被注入到柱一端的进样口中，在载气带动下通过色谱柱，分析物的分子会受到柱壁或柱中填料的吸附。由于不同的样品具有不同的物理和化学性质，与特定的固定相有着不同的相互作用，使得每一种类型的分子都有自己的通过速率，因此，分析物中的各种不同组分就会在不同的时间到达柱的末端，从而得到分离。当化合物从柱的末端流出时，它们被检测器检测到，产生相应的信号，并被转化为电信号输出，从而确定每一个组分到达色谱柱末端的时间顺序以及每一个组分...