土样中淀粉降解细菌的筛选（设计性实验）一、实验目的1. 掌握土壤样品中微生物菌种分离和筛选技术的实验设计方案。2. 掌握富集、平板稀释涂布法、分离筛选产淀粉酶菌株的基本原理。3. 初步掌握从土壤样品中分离筛选产淀粉酶菌株的基本技术。二、实验原理在自然条件下，产淀粉酶的细菌和其它各种细菌混杂生活在土壤中，要想分离出来必须建立相应的“筛子”。 淀粉酶能使淀粉分解成葡萄糖，而淀粉与碘液发生反应形成蓝色化合物。葡萄糖不与碘液发生反应形成蓝色化合物，结果可使淀粉酶产生菌周围形成透明圈，从而筛选出淀粉酶产生菌。微生物酶产生菌的筛选具体分为增殖培育、初筛和复筛过程。增殖培育是通过控制培育基的营养成分和/或培育条件使样品中的目的菌得以大量繁殖,而非目的菌的生长受到抑制或繁殖减缓,从而提高样品中目的菌的数量和比例。初筛是对所得的纯种进行检测。由于淀粉酶是胞外酶，在分离培育基中加适量可溶淀粉通过平板透明圈法来检测淀粉酶产生菌。筛选透明圈比值大的菌株接种到培育基中进行培育，再进行复筛。复筛的目的是淘汰底产菌。三、实验材料1、培育基：蛋白胨， NaCl，可溶性淀粉，琼脂，蒸馏水。2、玻璃仪器: 培育皿 10 副，试管 10 支，三角瓶 6 个，移液管 10 支（1mL7支,10mL3 支），100mL 量筒 2 个,玻璃棒，玻璃珠。3、其它：酒精灯，硅胶塞,包装绳，包装纸,PH 试纸，接种环，电子天平，称量纸,高压蒸汽灭菌锅，摇床，角匙，记号笔等。四、方法与步骤1、土壤样品: 食品厂、粮食加工厂、饭店等日常接触淀粉较多的肥沃土壤。2、培育基的制备 (1)液体培育基：称取蛋白胨 1.0 g、NaCl0.5 g、可溶性淀粉 0.2 g 溶于装有100 mL 蒸馏水的三角瓶中，调 pH 为 7.2 至 7.4，分装为 2 个三角瓶,50mL/个,包扎，121℃高压蒸汽灭菌 20 分钟。(2)固体淀粉培育基：称取蛋白胨 1.5g， NaCl0.75g，可溶性淀粉 0.3g ，溶于装有 150 mL 蒸馏水的三角瓶中，再加入 3.0 g 琼脂粉并搅拌至充分溶解，调 pH为 7.2 至 7.4，包扎，121℃高压蒸汽灭菌 20 分钟。3、增殖培育称取土样 15 g，倒入盛有 40 mL 无菌水的带玻璃珠的三角瓶中，摇床振荡30 min 制成土壤悬液, 用无菌移液管分别吸取 10mL 土壤悬液加入液体培育基中,置于 37℃的恒温培育箱中培育 24h。4、初筛浇注 8 块平板培育基。取增殖培育后的菌液标记为 10－1。用无菌移液管吸取 10－1 的菌悬液 1mL 放入装...
