酸溶蛋白和粗蛋白测定

油 脂 得 检 验 与 分 析粗蛋白质得测定（凯氏半微量定氮法)测定原理 凯氏法得基本原理就是将含有蛋白质得样品与浓硫酸共热使其分解，其中氮元素变成铵盐。再经浓碱液作用，放出得氨气经硼酸吸收后用盐酸标准溶液滴定硼酸溶液所吸收得氨。计算出试样含氮量，乘以相关得蛋白质换算系数，即得打蛋白质得含量。 消化：蛋白质与浓硫酸混合加热,蛋白质被炭化分解，其中碳被氧化成二氧化碳,所含得氮则转变成硫酸铵残留于消化液中. 有机物（含 N、Ｃ、H、O、P、Ｓ等元素）+H ２S Ｏ 4CO2 ↑+（N Ｈ４）２SO4＋H３P Ｏ 4+SO2↑+S Ｏ３↑由于上述反应进行得很慢,消化需要很长时间，加入催化剂可加速反应。硫酸铜就是备用得催化剂，硫酸钾能提高硫酸得沸点,常将它们混合使用,起加速氧化、促进有机物分解得作用。蒸馏:消化所得得硫酸铵加碱蒸馏,氨就被释放出来. （NH4）2ＳＯ 4+ 2 Ｎ aO Ｈ=2 NH3·H2O＋ Na2S Ｏ 4 Ｎ H ３·H2O=NH3↑+H ２O生成得氨用硼酸溶液吸收。硼酸吸收氨后,指示剂颜色变化，再用盐酸滴定,直至恢复到原来得氢离子浓度为止,盐酸与样品中氨就是等摩尔反应。 2N Ｈ 3＋４ H3 Ｂ O3=（NH4)２ Ｂ 4O ７+５ H ２O （NH ４）2 B 4Ｏ 7+２ HCl+ 5H ２O =2NH ４C ｌ ＋4 Ｈ３ BO ３ 由于各种蛋白质得含氮量通常为１ 6％左右,将含氮量乘以蛋白质系数,即为粗蛋白质含量。试剂 浓硫酸—过氧化氢-水混合液（2+3＋１）。在 100mL 水中缓慢加入浓硫酸 200 ｍ L，冷却后加入 3 ０％过氧化氢 3 ０ 0mL，混匀备用，此液存放阴凉处可保存一个月。混合催化剂.10g 硫酸铜（Ｃ u ＳＯ 4·5H2O）、１ 00 ｇ硫酸钾、0、２ｇ硒粉，在研钵中研细,通过孔径 0、4 ５ mm 筛,混匀后备用。40 ｇ/100m Ｌ氢氧化钠溶液、２％硼酸溶液、0、01m ｏl/L 盐酸溶液。甲基红乙醇溶液:称取 0、１ｇ甲基红置于研钵中，加入少许 9 ５％乙醇，研磨溶解后加入７ 5mL95%乙醇。次甲基蓝乙醇溶液：0、１ g 次甲基蓝溶于８ 0mL95％乙醇中,临用时将以上两液按２：1 比例混合即成。在酸域呈紫红色,P Ｈ＝5、５时无色,在碱域呈绿色。仪器 5 ０ｍ L 凯氏烧瓶、1 ００ 0m Ｌ圆底烧瓶、1 ０ 0mL 锥形瓶、5m Ｌ（刻度 0、01ｍ L）微量滴定管、50mL 容量瓶、5m Ｌ移液管、凯氏蒸馏装置.操作方法 消化.用长条光滑纸称取试样 0、２~0、3g,精确到 0、0 ０ 01 ｇ(约含粗蛋白质...