大肠菌群的计数实验(6 页)Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。大肠菌群计数实验MPN 计数法一、设备和材料250ML 锥形瓶 3 个 100ML 烧杯 1 个250ML 量筒 1 个 1000ML 烧杯 1 个15*150mm 试管 3 个 1ML 刻度吸管 4 个 18*180mm 试管 20 个 杜氏小管玻璃棒 1 个 接种环 1 个剪刀 1 把 药匙 2 个均质器 天平（感量 0.1g）电炉 洗耳球二、实验准备1 、配制培育基： LST 培育基的配制：用天平称取 17.8gLST 培育基于锥形瓶中加入 500ML 蒸馏水加热煮沸至完全溶解分装于装有杜氏小管的大试管中，每管 10ML，共 10 管高温灭菌备用BGLB 培育基的配制：用天平称取 20gBGLB 培育基于锥形瓶中加入 500ML 蒸馏水加热煮沸至完全溶解分装于装有杜氏小管的大试管中，每管 10ML，高温灭菌备用2 、生理盐水 取 4.25g 氯化钠于大烧杯中加入 500ML 蒸馏水溶解取 225ML 生理盐水于锥形瓶中分别取 9ML 生理盐水于 3 只小试管中将分装好的生理盐水进行高温灭菌3 、灭菌： 将均质杯、100ML 烧杯、刻度吸管、剪刀、接种环、洗耳球高温灭菌备用三、取样在提交的产品中随机抽取三箱，从每箱中随机抽取未打开包装的产品 1 袋~3 袋，抽取不低于 250g 的样品作为微生物指标检验试样。四、检验程序 10 倍系列稀释检 样 25 g(mL)样品+225 mL 稀释液，均质 36℃±1℃ 48h±2h 36℃±1℃ 48h±2h 五、操作步骤初发酵试验1、称取 25g 样品，放人盛有 225m 生理盐水的无菌均质杯内，8 00or/min-10 000r/min 均质 1 min-2 min ，制成 1:10 的样品匀液。2、用 1ml 无菌吸管吸取 1:10 样品匀液 1ml，沿管壁缓缓注人 9ml生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管，使其混合均匀，制成 1:100 的样品匀液。选择 3 个适宜稀释度的样品匀液，接种 LST 肉汤管不产气产气大肠菌群阴大肠菌群阳性BGLB 肉不产产 气查 MPN报告结果3、换一只新的 1ml 无菌吸管吸取 1:100 样品匀液 1ml，沿管壁缓缓注人 9ml 生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管，使其混合均匀，制成 1:1000 的样品匀液。4、将三个连续稀释梯度的样品原液在进行 10 倍递增稀释时，吸取1 ml 样品匀液于 LST 肉汤，每个稀释度接种三管。5、同时做一组空白，在一支 LST 肉汤中接种 1ml 生理盐水。...
