生物化学实验报告论

生物化学实验报告论 文班级:质量 121 学号:200XXXX4119 姓名:张 XX 一、前言生物化学是一门联系生物和化学的一门科学学科，学习生物化学可以提高我们严谨的科学分析以及熟练的实验操作，本文主要讲了金黄色葡萄球菌核糖核酸酶的分离实验，金黄色葡萄球菌是人类的一种重要病原菌，属于葡萄球菌属，可引起许多严重污染，本文主要通过核酸酶活性的测定，考马斯亮蓝法测定蛋白质溶液浓度DEAE-纤维素的处理及装柱，蛋白质亚基分子量测定 SDS-PAGE 凝胶电泳 二、实验材料准备共分为四组，了解实验目的、方案、原理。 2.1、取已配制好的金黄色葡萄球菌于离心管内，8000rpm 离心除掉菌体，保留上清（留 1-2ml,p1）,用作后续实验。 2.2、将锥形瓶中的金黄色葡萄球菌液体放到沸水中煮 30 分钟，10000rpm 离心，保留上清液（留 1-2ml,p2）,用作后续实验。 2.3、将离心好的上清液取 60ml 进行 75%硫酸铵饱和度沉淀实验，放置离心管，配平后 4 度冰箱中放置 24 小时。将硫酸铵沉淀液 10000rpm 离心，去上清，保留沉淀，缓冲液洗涤，方法是在第一支离心管中加入 2ml 缓冲液混匀倒入第二支离心管中，再取2ml 于第一支离心管中洗一次，再倒入第二支离心管中，最后在第二支离心管中再加入 2ml 缓冲液。终体积为 6ml（留.5ml,p3）。 2.4、DEAE-纤维素的处理及装柱 2.4.1、处理本实验采纳的是 DEAE-纤维素 DE52 是弱酸型阴离子交换剂，具体处理方法为:先将 DE52 阴离子交换剂干粉浸泡于蒸馏水中，去除杂质；再在.5N 的 Hcl 溶液中浸泡 1h,再用无离子水或蒸馏水洗至 pH4 以上，并将其在抽滤中抽干；将抽干的离子交换剂浸在.5N 的 NaOH 溶液中 1h,再用无离子水或蒸馏水将其洗至中性。 2.4.2、装柱将层析柱清洗洁净垂直固定到层析架上，加体积的无离子水，打开下出液口，水流畅通，即刻将小烧杯中装有适宜浓度的柱才，轻轻倒入层析柱中，凝胶自然慢慢沉降在层析柱底部；凝胶沉积至高度 10cm 处，停止装柱；夹上止液夹。 2.4.3、平衡在柱层析上样前必须对层析柱进行平衡，将平衡缓冲液泵入到层析柱内，打开层析柱下端的出口，当下出口流出液的 PH 值与平衡缓冲液的 PH 值一致时（大于50ml 平衡液），层析柱达到了平衡。在本实验中，用.001MTrs-HCl 缓冲液 PH 9.0（内含.0001MEDTA）,预先将 DE-52 柱进行平衡。 2.5、上样平衡液 50ml 用于收集，收集 30-40ml 即可。然后装入透析袋，PEG2 包埋，浓缩...