准备工作：1、进入细胞室前,首先用 7 ５％酒精擦试工作台，接着紫外灭菌 3０—５ 0min，过后,关闭紫外灯,通风１０ｍ i ｎ。2、从冰箱中取出胰酶、Ｐ BS 缓冲液、培育基注意事项:1、所有实验用得器械,仪器灭菌，消毒,烘干。2、打开溶剂，培育瓶瓶盖时，瓶口及瓶盖在酒精灯上烤一下.3、用完溶剂，培育瓶时,瓶口及瓶盖也要在酒精灯上烤一下。开始工作:1、实验前换衣帽,开风淋，吹风。2、７５％乙醇擦手，然后用 75％乙醇擦一下台面,点燃酒精灯。３、取待用得细胞,旋紧瓶盖。4、弃去旧得培育液，把培育瓶放回原处.5、取移液管一支,塞棉花端，及管身,均在酒精灯上烤一下，套好吸球.6、用移液管加入适量得 PBS 缓冲液，缓慢荡洗一下细胞,然后将 PBS缓冲液弃掉。７、用移液管（微量枪）吸取适量胰酶约 2m ｌ（所用胰酶得量），弃掉枪头。８、将细胞置于 5％C Ｏ 2、３ 7 度培育箱中 1 ｍ in-２ min,目得:提高酶活性,促进消化。9、取待用细胞，取移液管一支，塞棉花端,及管身，均在酒精灯上烤一下,套好吸球.1 ０、用移液管加入适量得完全培育液冲洗（吹散细胞）细胞，将瓶底粘着得细胞吹散下来，再将细胞悬液移入得离心管中,封口，标签.1 １、离心 5 ｍ in，100 ０转/ｍ in。以下分别介绍：一 换液1、取待用得细胞，旋紧瓶盖。2、弃去旧得培育液，把培育瓶放回原处.３、取移液管一支，塞棉花端，及管身，均在酒精灯上烤一下，套好吸球。4、用移液管加入适量得 PBS 缓冲液,缓慢荡洗一下细胞,然后将 PBS缓冲液弃掉。5、取移液管一支，塞棉花端，及管身，均在酒精灯上烤一下,套好吸球。6、用移液管加入适量得细胞培育液于培育瓶中。7、将细胞置于 5%CO2、37 度培育箱培育.二 传代1、细胞离心毕，拆封,瓶口及瓶盖在酒精灯上烤一下，弃去上清液,吸取已配制得培育基适量，加入离心管中,将细胞重悬、吹匀。2、取 4－6 滴细胞悬液到新得培育瓶中，培育瓶中应先加好适量细胞培育液，吹散细胞，镜下观察,细胞密度适宜则置入 5%Ｃ O2、３ 7度细胞培育箱中。三 冻存１、细胞离心毕，拆封，瓶口及瓶盖在酒精灯上烤一下，弃去上清液。２、按胎牛血清：DM ＳＯ＝9：１得比例配制冻存液，装入青霉素瓶中。3、用移液管将冻存液平均加入离心管中,混匀离心管中细胞冻存液。4、用移液管将含细胞得冻存液移入冻存管中，封口,标签。5、冻存，需缓慢冻存,先放置 4 度冰箱 1 小时,然后放置—20 度冰箱2 小时，再置于-80 度冰箱...
