蛋白质含量测定——双缩脲试剂法 实验报告

生物化学实验报告姓 名: 学 号: 专业年级: 组 别: 生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称蛋白质含量测定——双缩脲试剂法实验日期实验地点合作者指导老师评分老师签名批改日期一、实验目得1、１、掌握双缩脲测定血清总蛋白得基本原理、操作;1.２。掌握双缩脲试剂得配制;1。3。熟悉血清总蛋白得临床意义;1。4。了解双缩脲法测定血清总蛋白得特点与注意事项。二、实验原理2、１.两分子尿素加热脱氨缩合成得双缩脲(H2N—O Ｃ－NH—CO—NH2),因分子内含有两个邻接得肽键,在碱性溶液中可与 Cu ２＋发生双缩脲反应,生成紫红色络合物、2。2。蛋白质分子含有大量彼此相连得肽键(-C Ｏ—NH-),同样能在碱性条件下与Cu ２+发生双缩脲反应,生成得紫红色络合物,且在５ 40n ｍ处得吸光度与蛋白质得含量在 1 ０～120g/L 范围内有良好得线性关系。 三、材料与方法:3、１、实验材料:3。１．1.实验试剂:① 小牛血清;②6、0 ｍｏ l/LN ａ OH 溶液;③ 双缩脲试剂:硫酸酮、酒石酸钾钠、碘化钾;④ 蛋白质标准液(70 ｇ/Ｌ);⑤0.9％Ｎａ Cl;⑥ 蒸馏水。3．1．2.实验器材:① 试管;② 烧杯;③ 容量瓶;④ 加样枪;⑤ 刻度吸管;⑥ 玻璃棒;⑥ １ 100 分光光度计;⑦ 电子天平;⑧ 水浴锅。3。2、实验步骤取 3 支试管,做好标记,按下表操作: 加入物(ml) B(空白) Ｓ(标准) Ｕ(待测)小 牛 血 清 (1: １ 0) － - ０。５蛋 白 质 标 准 液 ( １ :1 ０ ) - 0 、 ５ -0 、 9%Nacl ０ .5 — —双 缩 脲 试 剂 4 。 0 4 。 ０ 4。0a。各管混匀,观察各试管颜色;b.将各试管置于３ 7℃水浴锅中加热 20 ｍ in,观察颜色;c、将试管中得液体倒入比色杯中,置于 1100 分光光度计得样品槽内,在波长 54 ０ｎ m,以空白管调零,测 S 与 U 管吸得光度;d。测定结束后,将比色杯中得样品回收进试管。 依据公式算出结果: 四、结果与讨论:4.1。实验现象:① 选取三支干净无损得试管,从左往右依次加入 0。9%氯化钠溶液、蛋白质标准液、相应得小牛血清各０、5m ｌ,分别命名为 B 试管、S 试管与 U 试管,再分别向三支试管内加入 4m ｌ得双缩脲试剂,溶液均成蓝色透明状、② 将三支试管放入 3 ７℃水浴锅中加热 2 ０ m ｉ n,取出后,Ｂ试管呈淡蓝色,S 试 测定次数 1 2 3平均吸光度管与 U 试管均成浅紫色,且 S 试管得颜色比Ｕ试管得颜色深。(如图一) 图一 水浴后三支试管颜色 图...