第 30 讲 微生物的利用考试标准必考加试考试标准必考加试1.大肠杆菌的培养和分离√2.分离以尿素为氮源的微生物√考点一 微生物的培养和分离1．大肠杆菌(1)特性：大肠杆菌是革兰氏阴性、兼性厌氧(代谢类型)的肠道杆菌，在肠道中一般对人无害，但若进入人的泌尿系统，就会对人体产生危害。(2)用途：是基因工程技术中被广泛采用的工具。2．细菌的培养和分离(1)细菌的繁殖：以分裂的方式繁殖，分裂速度很快，约 20 min 分裂一次。(2)培养的方法：需要将已有细菌的培养物转移到新的培养基中，一般用接种环(工具)转移带菌的培养物。(3)细菌分离的方法与特点分离方法特点划线分离法操作简单涂布分离法操作复杂，单菌落更易分开3.大肠杆菌的培养和分离实验(1)实验内容：将大肠杆菌扩大培养和划线分离，即用 LB 液体 培养基扩大培养大肠杆菌，培养后再在 LB 固体平面 培养基上划线进行分离，随后培养基上就会形成一个个单独的菌落。(2)实验步骤培养基灭菌倒平板接种划线分离培养观察50 mL LB 液体培养基和 50 mL LB 固体培养基及培养皿高压蒸汽灭菌将培养基分别倒至 4 个灭菌后的培养皿中，水平放置，使之形成平面在装有液体培养基的三角瓶中接种大肠杆菌，培养 12 h用接种环在接种有大肠杆菌的三角瓶中蘸菌液一次，在固体培养基的平板上连续划线，盖好培养皿培养皿倒置(盖在下面)，放在 37 ℃恒温培养箱中培养 12～24 h 后，可看到划线的末端出现不连续的单个菌落(3)大肠杆菌分离的用途：单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。4．微生物两种常用的接种方法比较比较划线分离法涂布分离法工具接种环玻璃刮刀原理通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细菌细胞繁殖而来的肉眼可见的细胞群体，即菌落将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细菌细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落 特点方法简单，但不适宜计数单菌落更易分开，但操作复杂些目的使培养基上形成由单个细菌细胞繁殖而来的子细胞群体——菌落思考讨论1．连线无菌技术的方法、类型及对象，并总结消毒与灭菌的区别。消毒和灭菌的区别项目条件结果常用的方法消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部...
