基因工程(DNA 重组技术/基因拼接技术)基因工程是指根据人们的愿望,进行严格的设计,并通过体外 DNA 重组和转基因等技术,给予生物以新的遗传特性,从而制造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品
由于基因工程是在 DNA 分子水平上进行设计和施工的,因此又叫做 DNA 重组技术或基因拼接技术
DNA 重组技术的基本工具①、 “分子手术刀” ——限制性核酸内切酶(限制酶)A、作用——限制性核酸内切酶能识别双链 DNA 分子的某种特定的核苷酸序列,并在使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开B、限制性内切酶的切割方式:①在中心轴线两侧将 DNA 切开,切口是黏性末端
② 沿着中心轴线切开 DNA,切口是平末端
大肠杆菌的一种限制酶(EcoRⅠ)能识别 GAATTC 序列,SmaI 识别CCCGGG 序列:G A A T T C C T T A A G 中轴线C T T A A G A A T T C G C C C G G G G G G C C C C C C G G G G G G C C C 黏性末端平末端他们识别的核苷酸序列不同,但是切点都是在 G↓C 之间
C、比较有关的 DNA 酶(1)DNA 水解酶:能够将 DNA 水解成四种脱氧核苷酸,彻底水解成膦酸、脱氧核糖和含氮碱基 (2)DNA 解旋酶:能够将 DNA 或 DNA 的某一段解成两条长链,作用的部位是碱基和碱基之间的氢键
注意:使 DNA 解成两条长链的方法除用解旋酶以外,在适当的高温(如 94℃)、重金属盐的作用下,也可使 DNA 解旋
(3)DNA 聚合酶:能将单个的核苷酸通过磷酸二酯键连接成 DNA 长链
(4)DNA 连接酶:是通过磷酸二酯键连接双链 DNA 的缺口
注意比较 DNA 聚合酶和 DNA 连接酶的异同点
DNA 连接酶——“分子缝合针”( 1 ) DNA