实 验 二 蛋 白 质 得 显 色 反 应一、实验目得1 、了解构成蛋白质得基本结构单位及主要连接形式．2 、了解蛋白质与某些氨基酸得呈色反应原理。3 、学习几种常用得鉴定蛋白质与氨基酸得方法。二、呈色反应1 、双缩脲反应（1)原理:尿素加热至１８0oC 左右, 生成双缩脲并放出一分子氨。双缩脲在碱性条件下能与Ｃu2+结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似, 也能发生此反应( 二肽与氨基酸都不能发生双缩脲反应）。可用于蛋白质得定性或定量测定。反应式如下: 双缩脲反应不仅为含有两个以上肽键得物质所有, 含有一个肽键与一个-CS-NH２ , —ＣＨ2—N Ｈ2, -C ＨＲ-NH2 ， -CＨ2— ＮH2- ＣH-ＮH2 －C Ｈ2-OH 或—ＣＨOHＣH２ ＮH2 等基团得物质以及乙二酰二胺等物质也有此反应。NH3 也干扰此反应, 因为N Ｈ３ 与Cu2+ 可生成暗蓝色得络离子Ｃu(ＮH３ )４ ２ + 。因此, 一切蛋白质或二肽以上得多肽都有双缩脲反应, 但有双缩脲反应得物质不一定都就是蛋白质或多肽．（2)试剂①尿素，②1 ０％氢氧化钠溶液，③１％硫酸铜溶液，④２% 卵清蛋白溶液( 改为蛋清溶液:水＝ 1 ：9 ）(3）操作取少量尿素结晶, 放在干燥试管中。用微火加热使尿素熔化. 熔化得尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨, 形成双缩脲。冷后, 加10% 氢氧化钠溶液约1mL,振荡混匀，再加1%硫酸铜溶液１滴, 再振荡。观察出现得粉红颜色。要避开添加过量硫酸铜，否则，生成得蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。( 由于杂质以及氨气得干扰, 导致颜色不都就是紫红色)向另一试管加2%卵清蛋白溶液（改为蛋清溶液: 水= 1 ：９）约１m Ｌ与１0%氢氧化钠溶液约２m Ｌ, 摇匀，再加1 ％硫酸铜溶液2 滴, 随加随摇. 观察紫玫瑰色得出现。2 、茚三酮反应CNH2ONH2CNH2ONH2180oCCCNHNH2NH2OO+NH3双缩脲 CCNH2NH2NHOOCu2+OH+NHCCO-ONH....CuNHNHCONHCO-NH2ˉ紫红色化合物 （1) 原理蛋白质、多肽与各种氨基酸以及所有 —氨基酸均能发生该反应 ，除无α- 氨基得脯氨酸与羟脯氨酸呈黄色反应外, 其它均生成蓝紫色化合物, 最终生成蓝色化合物. 氨、β—丙氨酸与许多一级氨化合物都有此反应. 尿素、马尿酸、二酮吡嗪与肽键上得亚氨基不呈现此反应。因此, 虽然蛋白质或氨基酸均有茚三酮反应，但能与茚三酮反应呈阳性反应得不一定都就是蛋白质或氨基酸。该反应分为两步，第一步就是氨基酸被...
