免疫组化常用试剂

免疫组化常用试剂免疫细胞化学常用试剂介绍 佚名 一、固定剂 大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学讨论之前，常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此，在进行免疫细胞化学讨论之前，很有必要了解所要讨论的物质（蛋白质或肽类）的化学性质，并根据需要来选择适宜的固定剂（或固定方法）以及改进固定条件。 目前，免疫细胞化学讨论中常用的固定剂仍为醛类固定剂，其中以甲醛类和戊二醛最为常用。在此，简要介绍几种目前较为常用和推举的固定剂，以供读者选用。 1.4%多聚甲醛-0.1mol/L 磷酸缓冲液（pH7.3） 试剂：多聚甲醛 40g 0.1mol/L 磷酸缓冲液 至 1000ml 配制方法：称取 40g 多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入 500～800ml 0.1mol/L 磷酸缓冲液（Phosphate Buffer 以下简称 PB），加热至 60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）使粉末完全溶解，通常需滴加少许 1n NaOH 才能使溶液清亮，最后补足 0.1mol/L 的 PB 于 1000ml，充分混匀。 该固定剂较适于光镜免疫细胞化学讨论，最好是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定 2～24h。另外，该固定剂较为温柔，适于组织标本的较长期保存。 2.4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠 试剂：A 液：多聚甲醛 40g 蒸馏水 400ml B 液：Na2HPO4·2H2O 16.88g 蒸馏水 300ml C 液：NaOH 3.86g 蒸馏水 200m 配制方法：A 液最好在 500ml 的三角烧瓶中配制（方法同前），至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。注意，在溶解多聚甲醛时，要尽量避开吸入气体或溅入眼内。B 液和 C 液配制好后，将 B 液倒入 C 液中，混合后再加入 A 液，以 1n NaOH 或 1N HCl 将 pH 调至 7.2～7.4， 最后，补充蒸馏水至 1000ml 充分混合，4℃冰箱保存备用。 该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学讨论，用于免疫电镜时，最好加入少量新奇配制的戊二醛，使其终浓度为 0.5%～1%。该固定剂较温柔，适于组织的长期保存。组织标本于该固定液中，4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。 3．Bouin’s 液及改良 Bouin’s 液 试剂：饱和苦味酸 40%甲醛 250ml 冰醋酸 50ml 配制方法：先将饱苦味酸过滤，加入甲醛（有沉淀者禁用），最后加入冰醋酸，混合后存于 4℃冰箱中备用。冰醋酸最好在临用前加入。改良 Bouin’s 液即不加冰...