分子标记技术得种类根据不同得核心技术基础,D ＮＡ分子标记技术大致可分为三类: 第一类以 Souther ｎ杂交为核心， 其代表性技术为 RFL Ｐ;第二类以 PC Ｒ技术为核心，如 R Ａ PD、Ｓ SR、Ａ FL Ｐ、STS、S Ｒ A Ｐ、TRAP 等；第三类以 D Ｎ A序列（mR Ｎ A 或单核苷酸多态性)为核心,其代表性技术为Ｅ ST 标记、SNP 标记等。理想得分子标记应达到以下得要求:① 具有高得多态性;② 共显性遗传；③能够明确辨别等位基因;④ 分布于整个基因组中;⑤ 选择中性(即无基因多效性）;⑥ 检测手段简单、快速;⑦ 开发成本与使用成本尽量低廉;⑧ 在实验室内与实验室间重复性好。目前,没有任何一种分子标记均满足以上得要求，它们均具有各自得优点与不足。其特点比较见表一。1 限制性内切酶片段长度多态性标记（Res ｔ riction F ｒａ gm ｅ nt Ｌ ength Ｐ o ｌ ymo ｒ phis ｍ，R Ｆ LP)１974年,Grｏｚｄicｋｅr 等人鉴定温度敏感表型得腺病毒DNA突变体时，发现了经限制性内切酶酶解后得到得DNＡ片段产生了差异,由此首创了第一代ＤNA分子标记技术——限制性内切酶片段长度多态性标记（RFLP)。其原理就是由于不同个体基因型中内切酶位点序列不同(可能由碱基插入、缺失、重组或突变等造成)，利用限制性内切酶酶解基因组ＤNＡ时，会产生长度不同得ＤNＡ酶切片段，通过凝胶电泳将 DＮA片段按各自得长度分开,通过Soutｈerｎ印迹法,将这些大小不同得DNＡ片段转移到硝酸纤维膜或尼龙膜上,再用经同位素或地高辛标记得探针与膜上得酶切片段分子杂交，最后通过放射性自显影显示杂交带,即检出限制性片段长度多态性。进行 RＦLP时,酶切要彻底，注意内切酶得选择,对于亲缘关系很近得物种，可增加内切酶得使用种类。目前RFLP得使用领域很广泛,其具有以下优点:①RFＬP标记源于基因组DNA得自身变异,理论上可覆盖整个基因组,能提供丰富得遗传信息;②标记不受组织、环境与发育阶段得影响;③呈共显性，即杂交时等位DNA片段均呈现带,能区分纯合基因型与杂合基因型，Ｆ2表现出 1∶2∶１得孟德尔分离定律[３］，提供标记座位完全得遗传信息;④由于限制性内切酶得专一性使结果稳定可靠,重复性好。其缺点就是：①操作繁琐，费时;②酶切后得DNA质量要求高;③使用放射性同位素进行分子杂交，有危险性等。2 随机扩增多态性DNA标记 (Ｒandom Amｐlｉfｉeｄ Polｙmoｒphic ＤNＡ,RＡPD）20世纪80年代，基于PＣR技术得第二代分...
