各种蛋白标签汇总蛋白标签蛋白标签(ｐ ro ｔ ein ｔ ag)就是指利用 D ＮＡ体外重组技术,与目得蛋白一起融合表达得一种多肽或者蛋白,以便于目得蛋白得表达、检测、示踪与纯化等。随着技术得不断进展,讨论人员相继开发出了具有各种不同功能得蛋白标签。目前,这些蛋白标签已在基础讨论与商业化产品生产等方面得到了广泛得应用。标签纯化促进溶解度抗体效价细胞标记Hi ｓ 6++/—+/－ F ｌ ag+＋/-+ GST+++ MBP＋+++ Hi ｓ-MBP++＋+ Ｈ A ＋ eGF Ｐ/CF Ｐ/YFP ＋+＋Myc + His－Myc＋ + H ｉ s-A ｖ iTag™++ ＋＋++ Ｓ umo ++＋+ Hi ｓ－S ｕｍ o＋+++ + S Ｎ AP－Ｔ ag™++ ++++H ａ lo Tag™＋+ ＋+＋+T ｒ xHISHis6 就是指六个组氨酸残基组成得融合标签,可插入在目得蛋白得 C 末端或 N 末端。当某一个标签得使用,一就是能构成表位利于纯化与检测;二就是构成独特得结构特征(结合配体)利于纯化。组氨酸残基侧链与固态得镍有强烈得吸引力,可用于固定化金属螯合层析(IMA Ｃ),对重组蛋白进行分离纯化。 使用 His－tag 有下面优点: 标签得分子量小,只有~０、84KD,而 GS Ｔ与蛋白Ａ分别为～26K Ｄ与~3 ０ KD,一般不影响目标蛋白得功能; Ｈ is 标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在得条件下或变性条件下纯化,前者在纯化疏水性强得蛋白得到应用,后者在纯化包涵体蛋白时特别有用,用高浓度得变性剂溶解后通过金属螯与亲与层析去除杂蛋白,使复性不受其它蛋白得干扰,或进行金属螯与亲与层析复性; Ｈ is 标签融合蛋白也被用于蛋白质—蛋白质、蛋白质－D Ｎ A 相互作用讨论; His 标签免疫原性相对较低,可将纯化得蛋白直接注射动物进行免疫并制备抗体。 可应用于多种表达系统,纯化得条件温与; 可以与其它得亲与标签一起构建双亲与标签、Flag 标签蛋白Flag 标签蛋白为编码 8 个氨基酸得亲水性多肽(D Ｙ KD Ｄ DDK),同时载体中构建得Ｋ o ｚ ak 序列使得带有 FL Ａ G 得融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。 Ｆ LAG 作为标签蛋白,其融合表达目得蛋白后具有以下优点: FL Ａ G 作为融合表达标签,其通常不会与目得蛋白相互作用并且通常不会影响目得蛋白得功能、性质,这样就有利用讨论人员对融合蛋白进行下游讨论。 融合 FLAG 得目得蛋白,可以直接通过 F Ｌ AG 进行亲与层析,此层析为非变性纯化,可以纯化有活性得融合蛋白,并且纯化...
