专题五 遗传的分子基础时间 -2-24第二部分 基因工程一、 考纲要求: 1、 基因工程的诞生( Ⅰ) 2、 基因工程的原理及技术( 含 PCR 技术) ( Ⅱ) 3、 基因工程的应用( Ⅱ) 4、 蛋白质工程( Ⅰ) 二、 知识网络: 三、 课本填空: 【基因工程的概念】基因工程是指根据人们的愿望, 进行严格的设计, 经过体外DNA 重组和转基因技术 , 给予生物以新的遗传特性, 制造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在DNA 分子水平 上进行设计和施工的, 又叫做 DNA 重组技术 。基因工程的原理是 ( 一) 基因工程的基本工具: 限制酶、 DNA 连接酶、 载体1.”分子手术刀”——限制性核酸内切酶 ( 简称为限制酶 ) ( 1) 来源: 主要是从 中分离纯化出来的。( 真核生物中也有, 如: 酵母菌) ( 2) 功能: 能够识别双链 DNA 分子的某种特定的核苷酸序列, 而且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的 断开, 因此具有专一性。 大多数限制酶的识别序列由 6 个核苷酸组成, 少数也有 4、 5、 8 个组成。( 3) 结果: 经限制酶切割产生的 DNA 片段末端一般有两种形式: 和 。2.”分子缝合针”——DNA 连接酶 (1)两种 DNA 连接酶( DNA 连接酶和 DNA连接酶) 的比较: ① 相同点: 都缝合磷酸二酯键。② 不同点: E·coliDNA 连接酶来源于大肠杆菌, 只能将双链 DNA 片段互补的 末端之间的磷酸二酯键连接起来; 而 T4DNA 连接酶来源于 T4 噬菌体, 能缝合两种末端, 但连接平末端的之间的效率较低。(2)与 DNA 聚合酶作用的异同:DNA 聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端, 形成磷酸二酯键。DNA 连接酶是连接两个 DNA 片段 的末端, 形成磷酸二酯键。3.”分子运输车”——载体( 1) 载体具备的条件: ① 能在受体细胞中 , 或整合到染色体 DNA 上, 随染色体 DNA进行同步复制。② 具有一至多个 , 供外源 DNA 片段插入。③ 具有 , 供重组 DNA 的鉴定和选择。( 注意: 标记基因不一定都是抗性基因) ( 2) 最常见的载体是 ,它是一种裸露的、 结构简单的、 独立于细菌拟核 DNA 之外, 并具有自我复制能力的双链 状 DNA 分子。( 天然质粒常需进行人工改造) ( 3) 其它载体: 、 (二)基因工程的基本操作程序: 基因工程的操作程序主要包括四个步骤: 、 、 、 第一步: 目的基因的猎取1.目的基因主要是指: 编码 的结构基因...
