病原菌得分离培育方法一、基本原理 植物病原菌得分离培育，就是植物病理实验室工作中得基本技能。为了获得某微生物得纯培育,一般就是根据该微生物对营养、酸碱度、氧气等条件要求不同,而供给它们适宜得生活条件,即让病原菌生活在适宜得培育基上，或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长,而抑制其她菌生长得环境,从而得到纯菌株.植物病原真菌得分离方法主要有组织分离法与稀释分离法两种.最常用得方法就是组织分离法,而稀释分离法主要用于病组织上产生大量孢子得病原真菌得分离。为了获得分离菌得纯培育,必须要进行分离菌得纯化，纯化得方法类似于分离工作中采纳得稀释分离法或划线分离法。二． 病原真菌得分离培育（花生褐斑病为例)1. 分离得准备工作（１)分离材料准备:花生褐斑病叶片：病斑圆形或近圆形暗褐色、黑褐色,淡黄色晕圈。背面有许多黑色小点,呈同心轮纹状排列。(2)培育基得准备： PDA 培育基,加热熔化,紫外灭菌后倒板； （３)分离工作仪器与用品:超镜工作台、培育箱、无菌培育皿、剪刀、解剖刀、镊子、接种铲(针）、７ 0％酒精、0。1%升汞、酒精灯、火机、记号笔、橡皮筋套、可调式电炉等。（升汞就是剧毒药物,在操作时应特别小心)。2. 组织分离法 （1） 工作前用肥皂洗手,无菌操作前还要用７ 0%酒精擦拭双手;在使用无菌操作间时，呼吸要轻,不要说话。（2） 酒精灯放入中间合适位置,点燃后不要在移动,保证火焰周围无菌环境;（3） 取花生褐斑病得症状典型病叶(或其她分离材料），选择典型得单个病斑，用剪刀或解剖刀从病斑边缘(病健交界处)切取小块病组织数块。(选择新患病得组织作为分离得材料,可以减少腐生菌混入得机会。腐生菌一般在发病很久而已经枯死或腐败得部分滋生,因此，一般斑点病害应在临近健全组织得部分分离。)（4） 表面消毒:用菌培育皿一次准备流程(75％酒精—0、1%升汞—无菌水-无菌水—无菌水）,将病组织放人 7 ０%酒精中浸 3-5s 后,按无菌操作法将病组织移人０。1%升汞液中分别表面消毒１ mi ｎ左右（如植物组织柔嫩,则表面消毒时间宜短;反之则可长些），然后放入灭菌水中连续漂洗三次,除去残留得消毒剂。（5） 用无菌操作法将病组织移至平板培育基上，每皿内放 3—5 块。(在将病组织小块移放到平板表面之前,应将其在无菌吸水纸上吸去多余得水，以大大减少病组织附近出现细菌污染).（6） 将培育皿倒置放人 25 ℃左右恒温箱内培育。一般３－4d 后观察待分离菌生长结果;若病组织小块上均长出...
