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DNA提取过程中各种试剂的作用

DNA提取过程中各种试剂的作用_第1页
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SDS 是离子型表面活性剂。它主要功能有:(1)溶解细胞膜上的脂质与蛋白,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。(2)解聚细胞中的核蛋白。(3)SDS 能与蛋白质结合成为 R-O-SO3-…R+-蛋白质的复合物,使蛋白质变性而沉淀下来。 但是 SDS 能抑制核糖核酸酶的作用,所以在以后的提取过程中,必须把它去除洁净,防止在下一步操作中 (用 RNase 去除 RNA 时)受到干扰。无水乙醇沉淀 DNA用无水乙醇沉淀 DNA,这是实验中最常用的沉淀 DNA 的方法。乙醇的优点是可以任意比和水相混溶, 乙醇与核酸不会起任何化学反应,对 DNA 很安全,因此是理想的沉淀剂。 DNA 溶液是 DNA 以水合状态稳定存在,当加入乙醇时,乙醇会夺去 DNA 周围的水分子,使 DNA 失水而易于聚合。一般实验中,是加 2 倍体积的无水乙醇与 DNA 相混合,其乙醇的最终含量占 67%左右。 因而也可改用 95%乙醇来替代无水乙醇(因为无水乙醇的价格远远比 95%乙醇昂贵)。 但是加 95%的乙醇使总体积增大,而 DNA 在溶液中有一定程度的溶解,因而 DNA 损失也增大。CTAB(十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性. 在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物,只是不能沉淀核酸.通过有机溶剂抽提,去除蛋白,多糖,酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来. 注:CTAB 溶液在低于15℃ 时会形成沉淀析出,因此在将其加入冰冷的 植物材料之前必须预热,且离心时温度不要低于 15℃.Tris-HCL:缓冲体系。提供稳定 pH;NaCl:可以降低 DNA 在水中的溶解度,并且不破坏 DNA 的结构;EDTA: Ca2+ Mg2+ 的螯合剂,抑制 DNase 活性;SDS:使蛋白变性,促进蛋白质和 DNA 的分离;巯基乙醇:抗氧化剂,防止酚氧化成醌,保护 DNA;也有人说可以用来消泡;醋酸钾:钾离子置换 SDS 的钠离子,形成不溶于水的 PDS,将大量蛋白同步沉淀下来。氯仿:异戊醇:使蛋白变性。氯仿的作用是变性剂、抽提脂溶性物质;异戊醇作用是 A.降低表面张力、阻止气泡的产生;B.有助于分相(使离心后水相、有机相稳定)(剧烈震荡时容易产生气泡,气泡会阻止相互间的充分作用);异丙醇:沉淀 DNA;70%乙醇:洗涤 DNA;(盐、蛋白等溶于 70%乙醇,而 DNA 不溶)100%乙醇:可以用于沉淀 DNA,也可以用于使 DNA 快速干燥

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