MAPK阻滞剂在小鼠体内外对多房棘球蚴抑制效果的研究

MAPK 阻滞剂在小鼠体内外对多房棘球蚴抑制效果的讨论目的:对 MAPK 信号通路阻滞剂在小鼠体内外抗多房棘球蚴的效果进行评价。方法:从感染小鼠体内收集多房棘球蚴包囊组织及原头节,利用蛋白芯片技术筛选出泡球蚴组织中高表达的关键靶点蛋白并猎取对应的阻滞剂,将 36 只 4 周龄的雌性 BALB/c 小鼠通过腹腔注射原头节混悬液感染泡球蚴建立动物模型,再灌胃给药 6 周后评价药物抗泡球蚴效果。体内实验分为 PBS 对比组,阿苯达唑对比组,实验药物组 A(TRx0237 mesylate),实验药物组 B(GDC-0994),实验药物组 C(Pifithrin-βhydrobromide),实验药物组 D(Selonsertib)6 组。体外实验在含青/链霉素及10%胎牛血清的 1066 培育基中培育泡球蚴原头节并从第 24 小时开始每隔 48 小时通过荧光显微镜对原头节存活率进行观测与记录,实验分组为 PBS 对比组,DMSO 溶剂对比组,实验药物组 A(TRx0237 mesylate),实验药物组 B(GDC-0994),实验药物组 C(Pifithrin-βhydrobromide),实验药物组D(Selonsertib),其中四个药物组每组内再分为 5μM、30μM、55μM、80μM 四个药物浓度梯度,每个浓度梯度设置 3 个复孔。按体外实验中药物浓度梯度分组进行泡球蚴生发层细胞毒性实验以及 L02细胞毒性实验。结果:蛋白芯片实验中筛选出 MAPK 信号通路靶点为Tau、ERK、p53、ASK1,找到对应阻滞剂分别为 TRx0237 mesylate、GDC-0994、Pifithrin-βhydrobromide、Selonsertib;体内实验中 PBS 对比组,阿苯达唑对比组,实验药物组 A、B、C、D 的泡球蚴包囊重量均值分别为 873 mg、335 mg、323mg、370 mg、340 mg、642 mg,阿苯达唑药物组与四种阻滞剂药物组的泡球蚴包囊湿重减重率分别为 61.63%、63%、57.61%、61.05%、26.46%,阿苯达唑、TRx0237 mesylate、GDC-0994 和 Pifithrin-βhydrobromide 抗泡球蚴效果与负性对比组相比差异有统计学意义(P<0.05)。体内实验中阻滞剂药物浓度升高与原头节活性抑制作用成正相关,给药 72小时起 TRx0237 mesylate 和 GDC-0994 与对比组原头节存活率差异有统计学意义(P<0.05)。细胞毒性实验中 TRx0237 mesylate 对生发层细胞抑制率随浓度梯度依次为 23.73%、46.59%、74.71%、77.44%,抑制效果显著,其余三种阻滞剂不显著;四种阻滞剂对 L02 细胞存在低中毒性。结论:MAPK 信号通路靶点 Tau、ERK、p53 在泡球蚴组织细胞中对其生理活动、生物效能具有重要的调控作用,相对应的 MAPK 阻滞剂在小鼠体内外对泡球蚴存在不同程度的抑制效果,具有成为治疗泡球蚴病的潜在药物靶点的可能。