细胞凋亡诱导及检测边晔

Hela 细胞的凋亡诱导及检测生 05 边晔 2025030026周二班 同组同学：解智博一、实验背景1.细胞凋亡细胞凋亡(apoptosis)或程序化细胞死亡(programmed cell death, PCD)，是多细胞有机体为调控机体发育，维护内环境稳定，由基因控制的细胞主动死亡过程，是细胞衰老自然死亡的主要方式之一，并强调这一过程是一种自然的生理学过程。由于细胞凋亡受到严格的由遗传机制决定的程序性调控，所以又被称为程序化细胞死亡。2.DAPI 染色DAPI 即 4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)﹐为一种荧光染料，可以穿透细胞膜与细胞核中的双链 DNA 结合而发挥标记的作用，可以产生比 DAPI 自身强 20 多倍的荧光。显微镜下可以看到显蓝色荧光的细胞，荧光显微镜观察细胞标记的效率高(几乎为 100 %) ，且对活细胞无毒副作用。 二、实验步骤1. 细胞凋亡诱导1)取 Hela 细胞（35mm 平皿中培育）镜检，观察细胞形状、数目、密度、污染状况等。2)吸弃皿中的培育基，再加入 1ml PBS 溶液洗去残余培育基，弃掉培育皿中液体。3)加入 1.5ml 新奇的完全培育基，加入 150l H2O2，至终浓度为 0.8mmol/L。4)标记，放入 1 号培育箱中培育。第二天检测细胞凋亡情况。2. 细胞凋亡检测1)取前一天加过氧化氢培育的 hela 细胞，加入 200l 胰酶消化 3 分钟，再加入适量 PBS 溶液并反复吹吸至细胞分散，转移到 1.5mL EP 管中，1000rpm 离心 5 分钟2)吸出上清，于沉淀中加入 100l 甲醇，冰箱中固定 10 分钟3)1000rpm 离心 5 分钟4)弃上清，加 100l PBS 洗涤沉淀细胞5)1000rpm 离心 5 分钟6)弃上清，加 50lPBS 溶液，0.5l DAPI 染液，室温染色 10 分钟7)1000rpm 离心 5 分钟8)弃上清，加 100l PBS 洗涤9)1000rpm 离心 5 分钟10) 弃上清，加 15l PBS 重悬细胞11) 取 15l 悬液于玻片上并于正置荧光显微镜下观察并拍照三、实验结果与分析1. 细胞凋亡检测 图 1：细胞凋亡检测（10x40）图 2：细胞凋亡检测（10x40）如图所示细胞中，可以见到较为分散且数量较少的染色亮斑；而且染色较深的区域呈弥散状，散布在细胞的各个位置，经确认应为处于凋亡细胞。但由于从诱导到检测的培育时间不足 20 小时，所以观察到的凋亡细胞比例较低。假如 24 小时后再检测，可能观察到的凋亡细胞会变多。四、讨论1. 凋亡检测注意事项1)为使得细胞充分接触固定液，应轻柔用移液器混合...