细菌普通染色和革兰氏染色

细菌普通染色和革兰氏染色 生命科学学院 生 02 孙禹 2025012376实验日期：2025-3-12 同组姓名：张宇成一、实验目的1、掌握细菌涂片标本的制备方法和普通染色的步骤2、掌握革兰氏染色法的操作步骤和关键点3、识别细菌的革兰氏染色结果4、学习无菌操作技术二、实验原理本次实验的主要内容是学习革兰氏染色方法。这一方法由丹麦病理学家 Christain Gram于 1884 年创立，通过革兰氏染色法可将细菌分为革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性菌(G-)两大类。这也是鉴别菌种的重要方法。革兰氏染色的原理主要是由于不同细菌细胞壁的结构不同所致：革兰氏阳性菌(G+)：细胞壁肽聚糖较厚，媒染剂可以和结晶紫形成复合物保存在细胞内，且经乙醇处理细胞壁孔径减小，难被番红再次染色，因而呈现紫色。革兰氏阴性菌(G-)：肽聚糖层很薄，脂肪含量高。乙醇能够使细胞壁更加疏松，且通透性增加。因而结晶紫颜色容易被脱去，经番红染色后呈现红色。另外，酵母菌也可被染色，且呈现革兰氏阳性结果。图一 革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌细胞壁差异示意图对比项目占细胞壁的干重(%)G+细菌G-细菌肽聚糖含量很高(30-95)含量很低(5-20)磷壁酸含量较高(<50)0类脂质一般无(<2)含量较高(约 20)蛋白质0含量较高染色结果紫色红色表一 革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌对比三、实验仪器、材料和用具 1、实验仪器和用具显微镜、擦镜纸、镜油、擦镜液、载玻片、盖玻片、接种环、酒精灯、吸水纸、镊子、打火机、相机(自带，Canon Power Shot A580) 2、实验药品结晶紫、革氏碘染液、95%乙醇脱色液、番红染液 3、实验样品枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和未知菌的 18 小时的液体培育液酵母菌平板、大肠杆菌平板、牙垢四、实验步骤本次实验可分为简单染色和革兰氏染色，通过简单染色学习基本的无菌操作技术，并练习细菌涂片标本的制备方法，包括操作法律规范、涂片、固定等。革兰氏染色主要学习染色的基本操作步骤，并以此鉴定菌种呈现革兰氏阳性或阴性结果。1、简单染色① 载玻片处理：用镊子取在 75%酒精中浸泡的载玻片，用吸水纸吸取酒精，在火焰上烘烤准备涂菌部位，除去油脂，冷却待用。② 涂片：对于液体涂片，左手持菌液试管，右手持接种环在火焰上烧灼灭菌，带接种环冷却后在火焰旁从试管中取一环菌液，在载玻片上涂一直径约 0.5-1cm 的均匀薄膜。若从平板上取菌，灭菌后用无菌接种环挑取少量菌体，涂在预先滴有一小滴水的载玻片上，使其薄而均匀。最后将接...