细菌的简单染色和革兰染色生 72 伍国羽 2025012357组别：周四班 2-1-1 实验同组人：王甦实验时间 2025 年 3 月 25 日实验目的1)掌握细菌涂片标本的制备方法和普通染色的步骤2)掌握革兰氏染色法的步骤和关键点3)识别细菌的革兰氏染色结果4)学习无菌操作技术 实验原理革兰染色法由丹麦病理学家 Christain Gram 于 1884 年创立，是细菌学中很重要的鉴别染色法，因为通过此法染色，可将细菌鉴别为革兰阳性菌（G+）和革兰阴性菌（G-）两大类。近年来由于对细菌细胞壁的结构有了较深化的了解，对革兰染色的机制提出不同的看法。一般认为革兰阳性细菌的肽聚糖层较厚，经乙醇处理后使之发生脱水作用而使孔径缩小，结晶紫与碘的复合物保留在细胞内而不被脱色；而革兰阴性细菌的肽聚糖层很薄，脂肪含量高，经乙醇处理后部份细胞壁可能被溶解并改变其组织状态，细胞壁孔径大，不能阻止溶剂透入，因而将结晶紫与碘的复合物洗去而被脱色。虽然如此，革兰染色的差异并不能完全认为是化学的差别，也有物理结构不同的结果，因为酵母菌细胞壁的成份完全和细菌不同，但具有革兰染色阳性反应。实验器材载玻片，盖玻片，接种环，酒精灯，显微镜、擦镜纸、镜油、擦镜液；结晶紫、革氏碘染液、95%酒精、番红染液；枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和未知菌的 18 小时的液体培育液，酵母菌、平板，大肠杆菌平板，牙垢。实验步骤1) 涂片左手持菌液 EP 管，右手持接种环，在火上对接种环灭菌后，从 EP 管中取一环培育液，于载玻片中央涂成薄层（事先在背面做好标记圆圈），将接种环在火焰上烧灼灭菌。若是从平板上取材，则事先在载玻片上滴一小滴水，在火焰附近把平板打开一小口，用接种环调取菌落边缘的物质涂于水滴上。室温下自然干燥。2) 固定 手持或镊子夹载玻片一端，标本面朝上，在灯的火焰外侧快速来回移动 3~4 次，共约 3~4 秒。要求玻片温度不超过 60℃，以玻片背面触及手背皮肤不觉过烫为宜，放置待冷后染色。3) 初染 滴加 1 滴草酸铵结晶紫染液，染色 1 分钟，水洗，吸干。4) 媒染 用碘液冲去残留水，再加 1 滴碘液覆盖涂片 1 分钟，水洗，吸干。5) 脱色 用吸水纸吸去玻片上的残留水，滴加 95%的乙醇脱色，轻轻摇动玻片，倒掉脱色液，直至流出的乙醇无紫色时，立即水洗，吸干。脱色时间 20~30 秒。6) 复染 滴加 1 滴蕃红染液复染 1-3 分钟以上，水洗。7) 镜检照相吸干载玻片背面及标本周围水渍,滴...
